InVivoMAb anti-mouse MHC Class I (H-2Kb) (Clone: Y-3)

Reed, B. K., et al. (2015). “Univerzální jednoduchý záchytný test pro hodnocení strukturální Integrity Multimerových činidel MHC.”PLoS One 10 (9): e0137984. PubMed

antigen-specifické T buněčné odpovědi lze vizualizovat pomocí MHC: peptidové multimery. V případech, kdy robustní kontroly T buněk nejsou snadno dostupné pro posouzení integrity multimerových činidel před analýzou omezeného vzorku, byla by užitečná schopnost posoudit strukturální integritu MHC multimerů před jejich použitím v kritických experimentech. Představujeme metodu zkoumání strukturální integrity MHC multimerů pomocí protilátek specifických pro konformační determinanty. Kuličky potažené anti-myším Ig jsou inkubovány s konformací specifickou myší monoklonální protilátkou a poté fluorescenčně značeným MHC multimerem. Schopnost perličky zachytit značený multimer může být měřena polokvantitativně průtokovou cytometrií. Tímto způsobem lze vizualizovat správné skládání multimerů MHC a porovnat šarže multimeru pro kontrolu kvality. Protože existuje více konformačních epitopů tvořených různými molekulárními interakcemi mezi těžkým řetězcem, peptidem a beta2M, může tento test zachycení posoudit věrnost každého aspektu multimerové struktury v závislosti na dostupnosti protilátek. Popsaný přístup by mohl být zvláště užitečný pro studie využívající nenahraditelné vzorky, včetně vzorků pacientů odebraných v klinických studiích.

Zanker, D., et al. (2015). “T buňky rozpoznávající 11mer chřipkový peptid komplexovaný s H-2D (b) vykazují promiskuitu pro délku peptidu.”Imunol Cell Biol 93 (5): 500-507. PubMed

repertoár T-buněk je vybrán podle komplexů self peptid-MHC (major histokompatibility complex) v brzlíku. Ačkoli většina periferních T buněk rozpoznává specifické peptidy odvozené od patogenu komplexované výhradně na vlastní MHC, některé mají zkříženou reaktivitu na jiné vlastní nebo cizí peptidy prezentované molekulami s vlastním MHC; jev často nazývaný promiskuita nebo degenerace receptoru T-buněk (TCR). Promiskuita TCR byla přičítána různým autoimunitním stavům. Na druhé straně se považuje za mechanismus pro relativně omezený repertoár TCR, který se zabývá potenciálně mnohem větším antigenním peptidovým repertoárem. Tato vlastnost byla také využita k obcházení vlastní tolerance pro vývoj vakcíny proti rakovině. Ačkoli mnoho studií zkoumalo takovou degeneraci peptidu stejné délky, jen málo studií uvádělo takové vlastnosti pro peptidy různé délky. V této studii jsme jemně charakterizovali odpověď CD8 (+) T-buněk specifickou pro 11mer peptid odvozený od základního proteinu 2 virové polymerázy chřipky a. Krátkodobá T-buněčná linie, přestože má vysoce zkreslený TCR, byla schopna reagovat s více peptidy různé délky sdílejícími stejnou jádrovou sekvenci. Out údaje jasně ukázaly význam podrobných a kvantitativních hodnocení pro takovou specificitu T-buněk. Naše data také zdůrazňují význam biochemické demonstrace přirozeně prezentovaného minimálního peptidu.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “Strukturální a funkční koreláty zvýšené antivirové imunity generované heteroklitickými epitopy CD8 T buněk.”J Immunol 192 (11): 5245-5256. PubMed

peptidy, které se špatně váží na molekuly MHC třídy I, často vyvolávají nízkofunkční avidity T buněčné odpovědi. Modifikace peptidů změnou kotevního zbytku usnadňuje zvýšenou vazebnou afinitu a může vyvolat T buňky se zvýšenou funkční aviditou vůči nativnímu epitopu (“heteroklitický”). Tato rozšířená vazba MHC pravděpodobně zvýší poločas a povrchovou hustotu heteroklitického komplexu, ale jak přesně tato zvýšená odpověď T buněk nastává in vivo, není známo. Dále ideální heteroklitický epitop vyvolá odpovědi T buněk, které zcela zkříženě reagují s nativním epitopem, maximalizují ochranu a minimalizují nežádoucí účinky mimo cíl. Takové epitopy bylo obtížné identifikovat. V této studii pomocí myší infikovaných myším koronavirem, který kóduje epitopy, které vyvolávají vysoké (S510, CSLWNGPHL)- a nízké (S598, RCQIFANI)-funkční avidity odpovědi, ukazujeme, že zvýšená exprese peptidu S598, ale ne S510 generoval T buňky se zvýšenou funkční aviditou. Tím pádem, imunitní odpovědi mohou být rozšířeny směrem k epitopům T buněk s nízkou funkční aviditou zvýšením hustoty Ag. Také jsme identifikovali heteroklitický epitop (RCVIFANI), který vyvolal odpověď T buněk s téměř úplnou zkříženou reaktivitou s nativním epitopem a prokázal zvýšenou hojnost MHC/peptidu ve srovnání s nativním s598. Strukturální a tepelné analýzy taveniny ukázaly, že substituce Q600V zvýšila stabilitu peptidového / MHC komplexu bez výrazné změny antigenního povrchu, což mělo za následek vysoce zkřížené reakce T buněk. Naše data zdůrazňují, že zvýšené zobrazení komplexu peptid / MHC přispívá k účinnosti heteroklitických epitopů a popisuje parametry pro maximalizaci imunitní odpovědi, které křížově reagují s nativním epitopem.

Bose, T. O., et al. (2013). “CD11a reguluje diferenciaci efektorových CD8 T buněk a vývoj centrální paměti v reakci na infekci Listeria monocytogenes.”Infect Immun 81 (4): 1140-1151. PubMed

beta2 (CD18) integriny s alfa-řetězci CD11a, -b,- c A-d jsou důležité adhezní molekuly nezbytné pro migraci leukocytů a buněčné interakce. Nedostatek CD18 vede k opakujícím se bakteriálním infekcím a špatnému hojení ran v důsledku snížené migrace leukocytů na zánětlivá místa. CD8 T buňky také upregulují CD11a, CD11b a CD11c po aktivaci. Úloha, kterou tyto molekuly hrají pro CD8 T buňky in vivo, však není známa. K určení funkce jednotlivých beta2 integrinů jsme zkoumali odpovědi CD8 T buněk na infekci Listeria monocytogenes u myší s deficitem CD11a, CD11b a CD11c. Absence CD11b nebo CD11c neměla žádný vliv na tvorbu CD8 T buněk specifických pro antigen. Naproti tomu velikost primární odpovědi CD8 T buněk u myší s deficitem CD11a byla významně snížena. Kromě toho odpověď u myší CD11a ( -/ – ) vykazovala sníženou diferenciaci krátkodobých efektorových buněk (KLRG1 (hi) CD127 (lo)), i když úrovně produkce cytokinů a granzymu B nebyly ovlivněny. Nedostatek CD11a měl za následek výrazně zvýšenou generaci CD62L (+) centrálních paměťových buněk. Překvapivě, CD8 T buňky postrádající CD11a namontován robustní sekundární odpověď na infekci. Celkově tato zjištění prokázala, že exprese CD11a přispívá k expanzi a diferenciaci primárních CD8 T buněk, ale může být postradatelná pro sekundární odpovědi na infekci.

Croft, N. P., et al. (2013). “Kinetika exprese antigenu a prezentace epitopů během virové infekce.”PLoS Patog 9 (1): e1003129. PubMed

současné znalosti o dynamice prezentace antigenu T buňkám během virové infekce jsou velmi špatné, přestože mají zásadní význam pro naše chápání antivirové imunity. Zde používáme pokročilou metodu hmotnostní spektrometrie k současné kvantifikaci prezentace osmi peptidových komplexů MHC viru vaccinia (epitopy) na infikovaných buňkách a množství jejich zdrojových antigenů několikrát po infekci. Výsledky ukazují překvapivý 1000-násobný rozsah v hojnosti, stejně jako nápadně odlišnou kinetiku napříč sledovanými epitopy. Těsná korelace mezi nástupem exprese proteinu a zobrazením epitopů pro většinu antigenů poskytuje dosud nejsilnější podporu, že prezentace antigenu je do značné míry spojena s translací a nikoli pozdější degradací antigenů. Konečně, ukazujeme úplný rozpor mezi hojností epitopů a hierarchií imunodominance těchto osmi epitopů. Tato studie zdůrazňuje složitost prezentace virového antigenu hostitelem a demonstruje slabost jednoduchých modelů, které předpokládají, že celkové hladiny proteinů jsou přímo spojeny s prezentací epitopů a imunogenicitou.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Lokalizace allodeterminantů na antigenech H-2Kb stanovených monoklonálními protilátkami a H-2 mutantními myšmi.”Proc Natl Acad Sci U S A 79(15): 4737-4741. PubMed

topografické uspořádání antigenních determinantů na molekule h-2Kb bylo zkoumáno protilátkovými soutěžními studiemi s řadou monoklonálních anti-Kb protilátek. Pro identifikaci aminokyselinových zbytků podílejících se na tvorbě allodeterminantů byly analyzovány h-2kb mutantní myši s definovanými aminokyselinovými substitucemi. Bylo zjištěno, že determinanty jsou umístěny v nejméně dvou prostorově oddělených shlucích na molekule H-2Kb. Determinanty jednoho klastru jsou ovlivněny mutacemi na pozicích aminokyselin 155 a 156, zatímco determinanty druhého klastru jsou modifikovány substitucemi aminokyselin v pozicích 77 a 89. U třetího shluku determinantů nebylo možné identifikovat žádné relevantní polohy aminokyselin, ale údaje o hospodářské soutěži naznačují, že tento shluk sousedí s druhým. Data naznačují, že první dvě domény antigenů H-2 nesou většinu allodeterminantů.

Kategorie: Articles

0 komentářů

Napsat komentář

Avatar placeholder

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.