InVivoMAb anti-mus MHC klasse i (H-2kb) (klon: Y-3)

Reed, B. K., Et Al. (2015). “Et alsidigt simpelt Indfangningsassay til vurdering af den strukturelle integritet af MHC Multimer reagenser.”PLoS en 10(9): e0137984. PubMed

Antigen-specifikke T-celleresponser kan visualiseres ved hjælp af MHC:peptid multimerer. I tilfælde, hvor robuste t-cellekontroller ikke er let tilgængelige for at vurdere integriteten af multimerreagenser inden analyse af begrænset prøve, ville evnen til at vurdere den strukturelle integritet af MHC-multimerer inden deres anvendelse i kritiske eksperimenter være nyttig. Vi præsenterer en metode til at undersøge den strukturelle integritet af MHC-multimerer ved hjælp af antistoffer, der er specifikke for konformationelle determinanter. Perler belagt med anti-mus Ig inkuberes med konformationsspecifik musemonoklonalt antistof og derefter med fluorescerende mærket MHC multimer. Perlens evne til at fange den mærkede multimeter kan måles semi-kvantitativt ved strømningscytometri. På denne måde kan den korrekte foldning af MHC-multimerer visualiseres, og batches af multimer kan sammenlignes for kvalitetskontrol. Fordi der er flere konformationelle epitoper dannet af forskellige molekylære interaktioner mellem tung kæde, peptid, og beta2M, dette indfangningsassay kan vurdere troværdigheden af hvert aspekt af multimerstruktur, afhængigt af tilgængeligheden af antistoffer. Den beskrevne fremgangsmåde kan være særlig nyttig til undersøgelser, der bruger uerstattelige prøver, herunder patientprøver indsamlet i kliniske forsøg.

sanker, D., et al. (2015). “T-celler, der genkender et 11mer peptid komplekseret til H-2D(b), viser promiskuitet for peptidlængde.”Immunolcelle Biol 93 (5): 500-507. PubMed

T-celle repertoire er valgt i henhold til selvpeptid-MHC (større histokompatibilitetskompleks) komplekser i thymus. Selvom de fleste perifere T-celler genkender specifikke patogenafledte peptider komplekseret til selv-MHC udelukkende, har nogle krydsreaktivitet over for andre selv-eller fremmede peptider præsenteret af selv-MHC-molekyler; et fænomen ofte betegnet t-cellereceptor (TCR) promiskuitet eller degeneration. TCR promiskuitet er blevet tilskrevet forskellige autoimmune tilstande. På den anden side betragtes det som en mekanisme for et relativt begrænset TCR-repertoire til at håndtere et potentielt meget større antigent peptidrepertoire. En sådan egenskab er også blevet brugt til at omgå selvtolerance for udvikling af kræftvaccine. Selvom mange undersøgelser undersøgte sådan degeneration for peptid af samme længde, rapporterede få undersøgelser sådanne egenskaber for peptider af forskellig længde. I denne undersøgelse karakteriserede vi fint CD8 (+) T-cellerespons specifikt for et 11mer peptid afledt af en viral polymerase basisk protein 2. Den kortvarige T-cellelinie, på trods af at den havde meget forudindtaget TCR, var i stand til at reagere med flere peptider af forskellig længde, der delte den samme kernesekvens. Ud data viste tydeligt betydningen af detaljerede og kvantitative vurderinger for sådan T-celle specificitet. Vores data understreger også vigtigheden af biokemisk demonstration af det naturligt præsenterede minimale peptid.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “Strukturelle og funktionelle korrelater af forbedret antiviral immunitet genereret af heteroklitiske CD8 T-celleepitoper.”J Immunol 192 (11): 5245-5256. PubMed

peptider, der binder dårligt til MHC klasse i-molekyler, fremkalder ofte lavfunktionelle aviditet T-celleresponser. Peptidmodifikation ved at ændre ankerresten Letter øget bindingsaffinitet og kan fremkalde T-celler med øget funktionel aviditet mod den native epitop (“heteroklitisk”). Denne forstærkede MHC-binding vil sandsynligvis øge halveringstiden og overfladetætheden af det heteroklitiske kompleks, men præcist hvordan denne forbedrede t-cellerespons forekommer in vivo vides ikke. Desuden vil den ideelle heteroklitiske epitop fremkalde t-celleresponser, der fuldstændigt krydsreagerer med den native epitop, maksimerer beskyttelse og minimerer uønskede effekter uden for målet. Sådanne epitoper har været vanskelige at identificere. I denne undersøgelse viser vi, at øget ekspression af peptid S598, men ikke S510, genererede T – celler med forbedret funktionel aviditet. Således kan immunresponser forstærkes mod t-celleepitoper med lav funktionel aviditet ved at øge Ag-densitet. Vi identificerede også en heteroklitisk epitop (RCVIFANI), der fremkaldte en T-cellerespons med næsten fuldstændig krydsreaktivitet med nativ epitop og demonstrerede øget MHC/peptid overflod sammenlignet med native s598. Strukturelle og termiske smelteanalyser viste, at substitutionen for 600V forbedrede stabiliteten af peptid/MHC-komplekset uden i høj grad at ændre den antigene overflade, hvilket resulterede i stærkt krydsreaktive T-celleresponser. Vores data fremhæver, at øget peptid / MHC-kompleks display bidrager til heteroklitisk epitopeffektivitet og beskriver parametre til maksimering af immunresponser, der krydsreagerer med den native epitop.

Bose, T. O., et al. (2013). “CD11a regulerer effektor CD8 T-celledifferentiering og central hukommelsesudvikling som reaktion på infektion med Listeria monocytogenes.”Inficere Immun 81 (4): 1140-1151. PubMed

beta2 (CD18) integriner med alfa-kæder CD11a, -b, -c og-D er vigtige adhæsionsmolekyler, der er nødvendige for leukocytmigration og cellulære interaktioner. CD18-mangel fører til tilbagevendende bakterielle infektioner og dårlig sårheling på grund af reduceret migration af leukocytter til inflammatoriske steder. CD8 T-celler opregulerer også CD11a, CD11b og CD11c ved aktivering. Den rolle, disse molekyler spiller for CD8 T-celler in vivo, er imidlertid ikke kendt. For at bestemme funktionen af individuelle beta2-integriner undersøgte vi CD8 T-celleresponser på Listeria monocytogenes-infektion i cd11a -, CD11b-og CD11c-mangelfulde mus. Fraværet af CD11b eller CD11c havde ingen effekt på dannelsen af antigenspecifikke CD8 T-celler. I modsætning hertil blev størrelsen af det primære CD8 T-cellerespons i cd11a-mangelfulde mus signifikant reduceret. Desuden udviste responsen i cd11a(-/-) mus reduceret differentiering af kortvarige effektorceller (KLRG1(hi) CD127(lo)), skønt cytokin-og B-produktionsniveauer ikke var påvirket. Især resulterede CD11a-mangel i stærkt forbedret generation af CD62L (+) centrale hukommelsesceller. Overraskende nok monterede CD8 T-celler, der manglede CD11a, et robust sekundært respons på infektion. Samlet set viste disse fund, at CD11a-ekspression bidrager til ekspansion og differentiering af primære CD8 T-celler, men kan være dispensabel for sekundære reaktioner på infektion.

Croft, N. P., et al. (2013). “Kinetik af antigenekspression og epitoppræsentation under virusinfektion.”PLoS Pathog 9 (1): e1003129. PubMed

nuværende viden om dynamikken i antigenpræsentation til T-celler under virusinfektion er meget dårlig på trods af at den er af grundlæggende betydning for vores forståelse af antiviral immunitet. Her bruger vi en avanceret massespektrometri-metode til samtidig at kvantificere præsentationen af otte vaccinia-viruspeptid-MHC-komplekser (epitoper) på inficerede celler og mængderne af deres kildeantigener flere gange efter infektion. Resultaterne viser en overraskende 1000 gange rækkevidde i overflod såvel som påfaldende forskellige kinetik på tværs af de overvågede epitoper. Den stramme sammenhæng mellem begyndelsen af proteinekspression og epitopvisning for de fleste antigener giver den stærkeste støtte til dato, at antigenpræsentation stort set er knyttet til translation og ikke senere nedbrydning af antigener. Endelig viser vi en fuldstændig afbrydelse mellem epitop overflod og immunodominans hierarki af disse otte epitoper. Denne undersøgelse fremhæver kompleksiteten af viral antigenpræsentation af værten og demonstrerer svagheden ved enkle modeller, der antager, at de samlede proteinniveauer er direkte knyttet til epitoppræsentation og immunogenicitet.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Lokalisering af allodeterminanter på h-2kb antigener bestemt med monoklonale antistoffer og H-2 mutante mus.”Proc Natl Acad Sci U S A 79 (15): 4737-4741. PubMed

det topografiske arrangement af antigene determinanter på h-2kb-molekylet blev undersøgt ved antistofkonkurrencestudier med en række monoklonale Anti-Kb-antistoffer. Til identifikation af aminosyrerester, der deltog i dannelsen af allodeterminanter, blev h-2kb-mutante mus med definerede aminosyresubstitutioner analyseret. Determinanterne viste sig at være placeret i mindst to rumligt separate klynger på h-2kb-molekylet. Determinanter for en klynge påvirkes af mutationer ved aminosyrepositioner 155 og 156, hvorimod determinanter for en anden klynge modificeres ved aminosyresubstitutioner i position 77 og 89. For en tredje klynge af determinanter kunne ingen relevante aminosyrepositioner identificeres, men konkurrencedata indikerer, at denne klynge støder op til den anden. Dataene antyder, at de to første domæner af H-2-antigener bærer de fleste allodeterminanter.

Kategorier: Articles

0 Kommentarer

Skriv et svar

Profilbillede pladsholder

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.