InVivoMAb Anti-Maus MHC Klasse I (H-2Kb) (Klon: Y-3)

Reed, B. K., et al. (2015). “Ein vielseitiger einfacher Capture-Assay zur Beurteilung der strukturellen Integrität von MHC-Multimerreagenzien.” Plus Eins 10(9): e0137984. PubMed

Antigenspezifische T-Zell-Antworten können mit MHC:peptide multimers visualisiert werden. In Fällen, in denen robuste T-Zell-Kontrollen nicht ohne weiteres verfügbar sind, um die Integrität von Multimer-Reagenzien vor der Analyse einer Probe zu bewerten, wäre die Fähigkeit, die strukturelle Integrität von MHC-Multimeren vor ihrer Verwendung in kritischen Experimenten zu bewerten, nützlich. Wir präsentieren eine Methode zur Untersuchung der strukturellen Integrität von MHC-Multimeren mit Antikörpern, die spezifisch für Konformationsdeterminanten sind. Mit Anti-Maus-Ig beschichtete Beads werden mit konformationsspezifischen monoklonalen Mausantikörpern und anschließend mit fluoreszenzmarkiertem MHC-Multimer inkubiert. Die Fähigkeit des Beads, das markierte Multimer einzufangen, kann semiquantitativ durch Durchflusszytometrie gemessen werden. Auf diese Weise kann die korrekte Faltung von MHC-Multimern visualisiert und Chargen von Multimern zur Qualitätskontrolle verglichen werden. Da es mehrere Konformationsepitope gibt, die durch verschiedene molekulare Wechselwirkungen zwischen schwerer Kette, Peptid und beta2M gebildet werden, kann dieser Capture-Assay die Genauigkeit jedes Aspekts der Multimerstruktur in Abhängigkeit von der Verfügbarkeit von Antikörpern beurteilen. Der beschriebene Ansatz könnte besonders nützlich sein für Studien mit unersetzlichen Proben, einschließlich Patientenproben, die in klinischen Studien gesammelt wurden.

Zanker, D., et al. (2015). “T-Zellen, die ein 11mer-Influenza-Peptid erkennen, das an H-2D (b) komplexiert ist, zeigen Promiskuität für die Peptidlänge.” Immunol Cell Biol 93(5): 500-507. PubMed

Das T-Zell-Repertoire wird nach Selbstpeptid-MHC-Komplexen (Major Histocompatibility Complex) im Thymus ausgewählt. Obwohl die meisten peripheren T-Zellen spezifische Pathogen-abgeleitete Peptide erkennen, die ausschließlich mit Selbst-MHC komplexiert sind, besitzen einige eine Kreuzreaktivität mit anderen Selbst- oder Fremdpeptiden, die von Selbst-MHC-Molekülen präsentiert werden; ein Phänomen, das oft als T-Zell-Rezeptor (TCR) -Promiskuität oder Degeneration bezeichnet wird. TCR-Promiskuität wurde verschiedenen Autoimmunerkrankungen zugeschrieben. Andererseits wird es als Mechanismus für ein relativ begrenztes TCR-Repertoire angesehen, mit einem potenziell viel größeren antigenen Peptidrepertoire umzugehen. Eine solche Eigenschaft wurde auch verwendet, um die Selbsttoleranz für die Entwicklung von Krebsimpfstoffen zu umgehen. Obgleich viele Studien solche Entartung für Peptid der gleichen Länge erforschten, berichteten wenige Studien über solche Eigenschaften für Peptide der unterschiedlichen Länge. In dieser Studie charakterisierten wir die CD8 (+) T-Zell-Antwort, die spezifisch für ein 11mer-Peptid ist, das aus Influenza A-Viruspolymerase-Basisprotein 2 abgeleitet ist. Die Kurzzeit-T-Zell-Linie konnte trotz stark voreingenommener TCR mit mehreren Peptiden unterschiedlicher Länge reagieren, die sich dieselbe Kernsequenz teilen. Die Daten zeigten deutlich, wie wichtig detaillierte und quantitative Bewertungen für eine solche T-Zell-Spezifität sind. Unsere Daten unterstreichen auch die Bedeutung der biochemischen Demonstration des natürlich vorgestellten Minimalpeptids.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “Strukturelle und funktionelle Korrelate einer verbesserten antiviralen Immunität, die durch heteroklitische CD8-T-Zell-Epitope erzeugt wird.” J Immunol 192(11): 5245-5256. PubMed

Peptide, die schlecht an MHC-Klasse-I-Moleküle binden, lösen häufig T-Zell-Reaktionen mit geringer funktioneller Avidität aus. Peptidmodifikation durch Veränderung des Ankerrestes erleichtert eine erhöhte Bindungsaffinität und kann T-Zellen mit erhöhter funktioneller Avidität gegenüber dem nativen Epitop (“heteroklitisch”) hervorrufen. Diese erhöhte MHC-Bindung erhöht wahrscheinlich die Halbwertszeit und die Oberflächendichte des heteroklitischen Komplexes, aber genau wie diese verstärkte T-Zell-Antwort in vivo auftritt, ist nicht bekannt. Darüber hinaus wird das ideale heteroklitische Epitop T-Zellantworten hervorrufen, die vollständig mit dem nativen Epitop kreuzreagieren, den Schutz maximieren und unerwünschte Off-Target-Effekte minimieren. Solche Epitope waren schwer zu identifizieren. In dieser Studie mit Mäusen, die mit einem Maus-Coronavirus infiziert sind, das Epitope kodiert, die hohe (S510, CSLWNGPHL) – und niedrige (S598, RCQIFANI) -funktionelle Aviditätsreaktionen hervorrufen, zeigen wir, dass eine erhöhte Expression von Peptid S598, aber nicht S510 T-Zellen mit erhöhter funktioneller Avidität erzeugt. Somit können Immunantworten auf T-Zell-Epitope mit geringer funktioneller Avidität durch Erhöhung der Ag-Dichte verstärkt werden. Wir identifizierten auch ein heteroklitisches Epitop (RCVIFANI), das eine T-Zellantwort mit nahezu vollständiger Kreuzreaktivität mit nativem Epitop hervorrief und eine erhöhte MHC / Peptid-Häufigkeit im Vergleich zu nativem S598 zeigte. Strukturelle und thermische Schmelzanalysen zeigten, dass die Q600V-Substitution die Stabilität des Peptid / MHC-Komplexes verbesserte, ohne die antigene Oberfläche stark zu verändern, was zu hochgradig kreuzreaktiven T-Zell-Reaktionen führte. Unsere Daten zeigen, dass eine erhöhte Peptid / MHC-Komplex-Anzeige zur Wirksamkeit heteroklitischer Epitope beiträgt und beschreiben Parameter zur Maximierung von Immunantworten, die mit dem nativen Epitop kreuzreagieren.

Bose, T. O., et al. (2013). “CD11a reguliert die Differenzierung der Effektor-CD8-T-Zellen und die Entwicklung des zentralen Gedächtnisses als Reaktion auf eine Infektion mit Listeria monocytogenes.” Infizieren Immun 81(4): 1140-1151. PubMed

beta2 (CD18) -Integrine mit den Alphaketten CD11a, -b, -c und -d sind wichtige Adhäsionsmoleküle, die für die Leukozytenmigration und zelluläre Wechselwirkungen notwendig sind. Ein CD18-Mangel führt zu wiederkehrenden bakteriellen Infektionen und einer schlechten Wundheilung aufgrund einer verminderten Migration von Leukozyten zu Entzündungsstellen. CD8-T-Zellen regulieren bei Aktivierung auch CD11a, CD11b und CD11c hoch. Die Rolle, die diese Moleküle für CD8-T-Zellen in vivo spielen, ist jedoch nicht bekannt. Um die Funktion einzelner Beta2-Integrine zu bestimmen, untersuchten wir CD8-T-Zellreaktionen auf Listeria monocytogenes-Infektionen bei CD11a-, CD11b- und CD11c-defizienten Mäusen. Das Fehlen von CD11b oder CD11c hatte keinen Einfluss auf die Erzeugung von antigenspezifischen CD8-T-Zellen. Im Gegensatz dazu war das Ausmaß der primären CD8-T-Zell-Antwort in CD11a-defizienten Mäusen signifikant reduziert. Darüber hinaus zeigte die Reaktion bei CD11a (-/-) Mäusen eine verringerte Differenzierung von kurzlebigen Effektorzellen (KLRG1 (hi) CD127 (lo)), obwohl die Zytokin- und Granzym-B-Produktion nicht beeinflusst wurden. Insbesondere führte ein CD11a-Mangel zu einer stark verbesserten Erzeugung von CD62L (+) zentralen Speicherzellen. Überraschenderweise zeigten CD8-T-Zellen, denen CD11a fehlte, eine robuste sekundäre Reaktion auf eine Infektion. Zusammengenommen zeigten diese Ergebnisse, dass die CD11a-Expression zur Expansion und Differenzierung primärer CD8-T-Zellen beiträgt, für sekundäre Reaktionen auf Infektionen jedoch möglicherweise entbehrlich ist.

Croft, N. P., et al. (2013). “Kinetik der Antigenexpression und Epitoppräsentation während der Virusinfektion.” PLoS Pathog 9(1): e1003129. PubMed

Das derzeitige Wissen über die Dynamik der Antigenpräsentation in T-Zellen während einer Virusinfektion ist sehr schlecht, obwohl es für unser Verständnis der antiviralen Immunität von grundlegender Bedeutung ist. Hier verwenden wir eine fortschrittliche Massenspektrometrie-Methode, um gleichzeitig die Präsentation von acht Vaccinia-Virus-Peptid-MHC-Komplexen (Epitopen) auf infizierten Zellen und die Mengen ihrer Quellantigene zu mehreren Zeitpunkten nach der Infektion zu quantifizieren. Die Ergebnisse zeigen einen verblüffenden 1000-fachen Bereich in der Häufigkeit sowie auffallend unterschiedliche Kinetik über die überwachten Epitope hinweg. Die enge Korrelation zwischen dem Einsetzen der Proteinexpression und der Epitopanzeige für die meisten Antigene liefert die bisher stärkste Unterstützung dafür, dass die Antigenpräsentation weitgehend mit der Translation und nicht mit dem späteren Abbau von Antigenen zusammenhängt. Schließlich zeigen wir eine vollständige Trennung zwischen der Epitophäufigkeit und der Immundominanzhierarchie dieser acht Epitope. Diese Studie hebt die Komplexität der viralen Antigenpräsentation durch den Wirt hervor und zeigt die Schwäche einfacher Modelle, bei denen davon ausgegangen wird, dass die Gesamtproteinspiegel direkt mit der Epitoppräsentation und der Immunogenität zusammenhängen.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Lokalisierung von Allodeterminanten auf H-2Kb-Antigenen bestimmt mit monoklonalen Antikörpern und H-2-mutierten Mäusen.” Proc Natl Acad Sci USA 79 (15): 4737-4741. PubMed

Die topographische Anordnung antigener Determinanten auf dem H-2Kb-Molekül wurde durch Antikörperwettbewerbsstudien mit einer Reihe monoklonaler Anti-Kb-Antikörper untersucht. Zur Identifizierung von Aminosäureresten, die an der Bildung von Allodeterminanten beteiligt sind, wurden H-2Kb-mutierte Mäuse mit definierten Aminosäuresubstitutionen analysiert. Es wurde festgestellt, dass sich die Determinanten in mindestens zwei räumlich getrennten Clustern auf dem H-2Kb-Molekül befinden. Determinanten eines Clusters werden durch Mutationen an den Aminosäurepositionen 155 und 156 beeinflusst, während Determinanten eines zweiten Clusters durch Aminosäuresubstitutionen an den Positionen 77 und 89 modifiziert werden. Für einen dritten Determinantencluster konnten keine relevanten Aminosäurepositionen identifiziert werden, aber Wettbewerbsdaten deuten darauf hin, dass dieser Cluster an den zweiten angrenzt. Die Daten legen nahe, dass die ersten beiden Domänen von H-2-Antigenen die meisten Allodeterminanten tragen.

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