InVivoMAb Anti-mouse MHC Class I (H-2kb) (klooni: Y-3)

Reed, B. K., et al. (2015). “Monipuolinen yksinkertainen Talteenottotesti MHC-Multimeerireagenssien rakenteellisen eheyden arvioimiseksi.”PLoS One 10 (9): e0137984. PubMed

Antigeenispesifiset t-soluvasteet voidaan visualisoida MHC:peptidi-multimeereillä. Niissä tapauksissa, joissa ei ole helposti saatavilla vahvoja T-solujen kontrolleja multimeerireagenssien eheyden arvioimiseksi ennen rajoitetun näytteen analysointia, kyky arvioida MHC-multimeerien rakenteellista eheyttä ennen niiden käyttöä kriittisissä kokeissa olisi hyödyllinen. Esittelemme menetelmän, jolla voidaan tutkia MHC-multimeerien rakenteellista eheyttä konformaatiotekijöille spesifisten vasta-aineiden avulla. Anti-hiiri Ig: llä päällystetyt Helmet inkuboidaan konformaatiospesifisellä hiiren monoklonaalisella vasta-aineella ja sen jälkeen fluoresoivasti merkityllä MHC-multimeerillä. Helmen kyky kaapata leimattu multimeeri voidaan mitata puolikvantitatiivisesti virtaussytometrialla. Tällä tavoin MHC-multimeerien oikea taitto voidaan visualisoida ja multimer-eriä voidaan verrata laadunvalvontaan. Koska raskasketjun, peptidin ja beta2M: n välillä on useita eri molekyylivuorovaikutusten muodostamia konformationaalisia epitooppeja, tällä capture-määrityksellä voidaan arvioida multimeerirakenteen kunkin aspektin uskollisuutta riippuen vasta-aineiden saatavuudesta. Kuvattu lähestymistapa voisi olla erityisen hyödyllinen tutkimuksissa, joissa käytetään korvaamattomia näytteitä, mukaan lukien kliinisissä tutkimuksissa kerätyt potilasnäytteet.

Zanker, D., et al. (2015). “T-solut, jotka tunnistavat h-2D(b): ksi kompleksoidun 11mer-influenssapeptidin, osoittavat peptidin pituuden olevan promiskuiteetti.”Immunol Cell Biol 93 (5): 500-507. PubMed

T-solujen repertuaari valitaan kateenkorvan itsepeptidi-MHC (major histocompatibility complex) – kompleksien mukaan. Vaikka useimmat perifeeriset T-solut tunnistavat spesifisiä taudinaiheuttajista johdettuja peptidejä, jotka ovat kompleksoituneet yksinomaan itse-MHC-molekyyleihin, joillakin on ristireaktiota muiden itsensä tai ulkomaisten peptidien kanssa, joita itse-MHC-molekyylit esittävät; ilmiötä kutsutaan usein T-solureseptoriksi (TCR), joka on irrallinen tai degeneroituva. TCR: n siveettömyyden on arveltu johtuvan erilaisista autoimmuunisairauksista. Toisaalta sitä pidetään mekanismina, jolla suhteellisen suppea TCR-repertuaari voi käsitellä mahdollisesti paljon laajempaa antigeenistä peptidirepertuaaria. Tällaista ominaisuutta on hyödynnetty myös syöpärokotteen kehittelyn itsetoleranssin ohittamiseen. Vaikka monet tutkimukset selvittivät tällaista degeneraatiota samanpituisille peptideille, harvat tutkimukset raportoivat tällaisia ominaisuuksia eripituisille peptideille. Tässä tutkimuksessa, me hienoksi luonnehdimme CD8 (+) T-soluvaste spesifinen 11mer peptidi johdettu influenssa A viruspolymeraasi perus proteiini 2. Lyhytkestoinen t-solulinja pystyi erittäin puolueellisesta TCR: stä huolimatta reagoimaan useiden eri pituisten peptidien kanssa, joilla oli sama ydinsekvenssi. Out-tiedot osoittivat selvästi, että yksityiskohtaiset ja kvantitatiiviset arvioinnit ovat tärkeitä tällaiselle T-solujen spesifisyydelle. Aineistomme korostavat myös luonnollisen minimaalisen peptidin biokemiallisen demonstroinnin tärkeyttä.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “Heterokliittisten CD8 T-solujen epitooppien tuottaman tehostetun antiviraalisen immuniteetin rakenteelliset ja toiminnalliset korrelaatit.”J Immunol 192 (11): 5245-5256. PubMed

peptidit, jotka sitoutuvat huonosti MHC-luokan I molekyyleihin, saavat usein aikaan heikosti toimivan aviditeetti-T-soluvasteen. Peptidin modifiointi muuttamalla ankkurijäännöstä helpottaa lisääntynyttä sitoutumisaffiniteettia ja saattaa aiheuttaa T-solujen lisääntynyttä toiminnallista aviditeettia kohti kotoperäistä epitooppia (“heteroclitic”). Tämä lisääntynyt MHC-sitoutuminen todennäköisesti lisää heterokliittisen kompleksin puoliintumisaikaa ja pintatiheyttä, mutta ei tiedetä tarkasti, miten tämä tehostunut t-soluvaste tapahtuu In vivo. Lisäksi ihanteellinen heterokliittinen epitooppi saa aikaan T-solujen vasteet, jotka täysin ristiinreaktioivat natiivin epitoopin kanssa, maksimoiden suojan ja minimoiden ei-toivotut off-target-vaikutukset. Tällaisia epitooppeja on ollut vaikea tunnistaa. Tässä tutkimuksessa hiirillä, joilla on hiiren koronavirus, joka koodaa epitooppeja, jotka aiheuttavat korkean (S510, CSLWNGPHL)- ja matalan (S598, RCQIFANI)-toiminnallisen aviditeettivasteen, osoitamme, että peptidin s598, mutta ei S510: n lisääntynyt ilmentyminen tuottaa T-soluja, joilla on parannettu toiminnallinen aviditeetti. Siten immuunivasteita voidaan lisätä kohti T-solujen epitooppeja, joilla on alhainen toiminnallinen aviditeetti, lisäämällä Ag-tiheyttä. Tunnistimme myös heterokliittisen epitoopin (rcvifani), joka aiheutti T-soluvasteen lähes täydellisellä ristireaktiivisuudella alkuperäisen epitoopin kanssa ja osoitti lisääntyneen MHC/peptidin runsauden verrattuna alkuperäiseen S598: aan. Rakenne-ja lämpösulatusanalyysit osoittivat, että q600v-substituutio paransi peptidi/MHC-kompleksin stabiilisuutta muuttamatta suuresti antigeenistä pintaa, mikä johti erittäin ristiinreagoiviin t-soluvasteisiin. Tietomme korostavat, että lisääntynyt peptidi / MHC-kompleksin näyttö edistää heterokliittistä epitooppitehoa ja kuvaavat parametreja, joilla maksimoidaan immuunivasteet, jotka ristiinreaktioituvat alkuperäisen epitoopin kanssa.

Bose, T. O., et al. (2013). “CD11a säätelee efektori CD8 T-solujen erilaistumista ja keskusmuistin kehittymistä vastauksena Listeria monocytogenes-infektioon.”Infect Immun 81(4): 1140-1151. PubMed

beta2 (CD18)-integriinit, joissa on alfaketjuja CD11a,- b,- c ja-d, ovat tärkeitä adheesiomolekyylejä, joita tarvitaan leukosyyttien migraatioon ja solujen yhteisvaikutuksiin. CD18-puutos johtaa toistuviin bakteeri-infektioihin ja heikkoon haavan paranemiseen leukosyyttien vähentyneen siirtymisen vuoksi tulehduskohtiin. CD8 T-solut säätelevät myös CD11a: ta, CD11b: tä ja CD11c: tä aktivoinnin yhteydessä. Näiden molekyylien merkitystä CD8 T-soluille in vivo ei kuitenkaan tunneta. Yksittäisten beta2-integriinien toiminnan määrittämiseksi tutkimme CD8 T-solujen vasteita Listeria monocytogenes-infektioon CD11a-, CD11b-ja CD11c-puutteellisilla hiirillä. CD11b: n tai CD11c: n puuttuminen ei vaikuttanut antigeenispesifisten CD8 T-solujen muodostumiseen. Sen sijaan primaarisen CD8 T-soluvasteen suuruus CD11a-puutoksesta kärsivillä hiirillä pieneni merkittävästi. Lisäksi vaste CD11a ( -/ -)-hiirillä osoitti lyhytikäisten efektorisolujen erilaistumisen vähenevän(KLRG1(hi) CD127 (lo)), vaikka sytokiinin ja granzyme B: n tuotantotasot eivät muuttuneetkaan. Erityisesti CD11a: n puute johti huomattavasti parannettuun CD62L (+) – keskusmuistisolujen tuotantoon. Yllättäen CD8 T-solut, joilta puuttui CD11a, saivat aikaan vankan sekundaarisen vasteen tartunnalle. Yhdessä nämä löydökset osoittivat, että CD11a: n ilmentyminen edistää primaaristen CD8 T-solujen laajenemista ja erilaistumista, mutta saattaa olla tarpeeton sekundaarisessa infektiovasteessa.

Croft, N. P., et al. (2013). “Antigeeniekspression kinetiikka ja epitooppi-esitys virusinfektion aikana.”PLoS Patog 9(1): e1003129. PubMed

nykyiset tiedot antigeenin esiintymistiheydestä t-soluille virusinfektion aikana ovat erittäin huonot, vaikka ne ovat erittäin tärkeitä virusvastaisen immuniteetin ymmärtämisen kannalta. Tässä käytämme kehittynyttä massaspektrometriamenetelmää kvantifioidaksemme samanaikaisesti kahdeksan vaccinia-viruksen peptidi-MHC-kompleksin (epitooppien) esittämisen infektoituneissa soluissa ja niiden lähtöantigeenien määrät useita kertoja tartunnan jälkeen. Tulokset osoittavat hätkähdyttävän 1000-kertainen valikoima runsaasti sekä silmiinpistävän erilaisia kinetiikka eri epitooppien seurataan. Tiukka korrelaatio proteiinin ilmentymisen alkamisen ja epitooppinäytön välillä useimpien antigeenien kohdalla antaa tähän mennessä vahvimman tuen sille, että antigeenin esittäminen liittyy suurelta osin antigeenien translaatioon eikä myöhempään hajoamiseen. Lopuksi, osoitamme täydellisen yhteyden näiden kahdeksan epitoopin runsauden ja immunodominanssihierarkian välillä. Tämä tutkimus korostaa viruksen antigeenin monimutkaisuutta isännässä ja osoittaa niiden yksinkertaisten mallien heikkouden, joissa kokonaisproteiinipitoisuudet oletetaan suoraan liittyvän epitoopin esittämiseen ja immunogeenisuuteen.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Allodeterminanttien lokalisointi h-2kb-antigeeneihin määritettynä monoklonaalisilla vasta-aineilla ja H-2-mutanttihiirillä.”Proc Natl Acad Sci U S A 79 (15): 4737-4741. PubMed

antigeenisten determinanttien topografista järjestelyä h-2kb-molekyylissä tutkittiin vasta-ainekilpailututkimuksilla monoklonaalisilla anti-Kb-vasta-aineilla. Kaikkien aminohappotekijöiden muodostumiseen osallistuvien aminohappojäämien tunnistamiseksi analysoitiin h-2kb-mutanttihiiret, joilla oli määritellyt aminohapposubstituutiot. Determinanttien havaittiin sijaitsevan h-2kb-molekyylissä ainakin kahdessa spatiaalisesti erillisessä klusterissa. Yhden klusterin determinantteihin vaikuttavat mutaatiot aminohappokohdissa 155 ja 156, kun taas toisen klusterin determinantteja modifioidaan aminohapposubstituutioilla kohdissa 77 ja 89. Kolmannelle taustatekijöiden ryppäälle ei voitu määrittää merkityksellisiä aminohappoasemia, mutta kilpailutiedot osoittavat, että tämä klusteri on toisen klusterin vieressä. Tiedot viittaavat siihen, että H-2-antigeenien kaksi ensimmäistä domeenia kuljettavat useimpia kaikkia taustatekijöitä.

Kategoriat: Articles

0 kommenttia

Vastaa

Avatar placeholder

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.