InVivoMAb anti-egér MHC I. osztály (H-2kb) (klón: Y-3)

Reed, B. K. et al. (2015). “Sokoldalú, egyszerű befogási vizsgálat az MHC Multimer reagensek szerkezeti integritásának felmérésére.”PLoS egy 10(9): e0137984. PubMed

az antigén-specifikus T-sejt válaszok megjeleníthetők MHC:peptid multimerek segítségével. Azokban az esetekben, amikor robusztus T-sejt kontrollok nem állnak rendelkezésre a multimer reagensek integritásának felmérésére a korlátozott minta elemzése előtt, hasznos lenne az MHC multimerek szerkezeti integritásának felmérése a kritikus kísérletekben való felhasználásuk előtt. Bemutatunk egy módszert az MHC multimerek szerkezeti integritásának vizsgálatára a konformációs determinánsokra specifikus antitestek felhasználásával. Az anti-egér Ig-vel bevont gyöngyöket konformáció-specifikus egér monoklonális antitesttel, majd fluoreszcensen címkézett MHC multimerrel inkubáljuk. A gyöngy azon képessége, hogy megragadja a jelölt multimert, félig kvantitatív módon mérhető áramlási citometriával. Ily módon láthatóvá válik az MHC multimerek helyes hajtogatása, és a multimer tételei összehasonlíthatók a minőségellenőrzés érdekében. Mivel a nehéz lánc, a peptid és a béta2m közötti különböző molekuláris kölcsönhatások során több konformációs epitóp képződik, ez a befogási vizsgálat felmérheti a multimer szerkezet minden aspektusának hűségét, az antitestek rendelkezésre állásától függően. A leírt megközelítés különösen hasznos lehet pótolhatatlan mintákat használó vizsgálatokban, beleértve a klinikai vizsgálatok során gyűjtött betegmintákat is.

Zanker, D., et al. (2015). “A H-2D(b) – re komplexált 11mer influenza peptidet felismerő T-sejtek promiszkuitást mutatnak a peptid hosszában.”Immunol Sejt Biol 93 (5): 500-507. PubMed

a T-sejt repertoárt az önpeptid-MHC (major histocompatibility complex) komplexek alapján választjuk ki a csecsemőmirigyben. Bár a legtöbb perifériás T-sejt felismeri a specifikus kórokozókból származó peptideket, amelyek kizárólag Ön-MHC-re komplexálódnak, egyesek keresztreaktivitással rendelkeznek más Ön-vagy idegen peptidekkel szemben, amelyeket Ön-MHC molekulák mutatnak be; ezt a jelenséget gyakran nevezik T-sejt receptor (TCR) promiszkuitás vagy degeneráció. A TCR promiszkuitását különféle autoimmun állapotoknak tulajdonították. Másrészt egy viszonylag korlátozott TCR repertoár mechanizmusának tekinthető egy potenciálisan sokkal nagyobb antigén peptid repertoár kezelésére. Ezt a tulajdonságot arra is felhasználták, hogy megkerüljék a rák elleni vakcina kifejlesztésének Ön toleranciáját. Bár sok tanulmány feltárta az azonos hosszúságú peptid ilyen degenerálódását, kevés tanulmány számolt be ilyen tulajdonságokról a különböző hosszúságú peptidek esetében. Ebben a tanulmányban finoman jellemeztük a CD8 (+) T-sejt válasz specifikus a 11mer peptid származó influenza a vírus polimeráz bázikus fehérje 2. A rövid távú T-sejtvonal, annak ellenére, hogy erősen elfogult TCR-vel rendelkezik, képes volt reagálni több különböző hosszúságú peptiddel, amelyek ugyanazt a magszekvenciát osztották meg. Az Out adatok egyértelműen megmutatták a részletes és mennyiségi értékelések fontosságát az ilyen T-sejt specificitás szempontjából. Adataink hangsúlyozzák a természetesen bemutatott minimális peptid biokémiai bemutatásának fontosságát is.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “A heteroclitikus CD8 T-sejt epitópok által generált fokozott vírusellenes immunitás strukturális és funkcionális korrelációi.”J Immunol 192 (11): 5245-5256. PubMed

az MHC I. osztályú molekulákhoz rosszul kötődő peptidek gyakran alacsony funkcionális aviditású T-sejtválaszokat váltanak ki. A peptid módosítása a horgonymaradék megváltoztatásával elősegíti a megnövekedett kötési affinitást, és fokozott funkcionális aviditású T-sejteket válthat ki a natív epitóp felé (“heteroclitikus”). Ez a kibővített MHC-kötés valószínűleg növeli a heteroclitikus komplex felezési idejét és felületi sűrűségét, de pontosan hogyan történik ez a fokozott T-sejt válasz in vivo nem ismert. Ezenkívül az ideális heteroclitikus epitóp olyan T-sejt válaszokat vált ki, amelyek teljesen keresztreakcióba lépnek a natív epitóppal, maximalizálva a védelmet és minimalizálva a nemkívánatos off-target hatásokat. Az ilyen epitópokat nehéz volt azonosítani. Ebben a tanulmányban egér koronavírussal fertőzött egerekkel, amelyek magas (S510, CSLWNGPHL) és alacsony (s598, RCQIFANI) funkcionális aviditási válaszokat kiváltó epitópokat kódolnak, megmutatjuk, hogy az S598 peptid fokozott expressziója, de az S510 nem fokozott funkcionális aviditású T – sejteket generált. Így az immunválaszok növelhetők az alacsony funkcionális aviditású T-sejt-epitópok felé az Ag sűrűségének növelésével. Azonosítottunk egy heteroclitikus epitópot (RCVIFANI) is, amely szinte teljes keresztreaktivitással T-sejt választ váltott ki natív epitóppal, és megnövekedett MHC/peptid abundanciát mutatott a natív S598-hoz képest. A szerkezeti és termikus olvadékvizsgálatok azt mutatták, hogy a Q600V szubsztitúció növelte a peptid/MHC komplex stabilitását anélkül, hogy nagymértékben megváltoztatta volna az antigén felületet, ami erősen keresztreaktív T-sejt válaszokat eredményezett. Adataink kiemelik, hogy a megnövekedett peptid / MHC komplex kijelző hozzájárul a heteroclitikus epitóp hatékonyságához, és leírja az immunválasz maximalizálásának paramétereit, amelyek keresztreakcióba lépnek a natív epitóppal.

Bose, T. O., et al. (2013). “A CD11a szabályozza az effektor CD8 T-sejtek differenciálódását és a központi memória fejlődését a Listeria monocytogenes fertőzésre adott válaszként.”Fertőz Immun 81(4): 1140-1151. PubMed

a cd11a,-b,- c és-d alfa-láncokkal rendelkező béta2 (CD18) integrinek fontos adhéziós molekulák, amelyek szükségesek a leukocita migrációhoz és a celluláris kölcsönhatásokhoz. A CD18 hiány visszatérő bakteriális fertőzésekhez és gyenge sebgyógyuláshoz vezet a leukociták gyulladásos helyekre történő csökkent migrációja miatt. A CD8 T-sejtek aktiválása után a CD11a, CD11b és CD11c is szabályozható. Azonban ezeknek a molekuláknak a szerepe a CD8 T-sejtekben in vivo nem ismert. Az egyes béta2 integrinek működésének meghatározásához CD8 T-sejt válaszokat vizsgáltunk a Listeria monocytogenes fertőzésre CD11a-, CD11b-és CD11c-hiányos egerekben. A CD11b vagy CD11c hiánya nem befolyásolta az antigén-specifikus CD8 T-sejtek képződését. Ezzel szemben az elsődleges CD8 T-sejt válasz nagysága CD11a-hiányos egerekben szignifikánsan csökkent. Ezenkívül a CD11a(-/-) egerekben a válasz a rövid életű effektor sejtek (KLRG1(hi) CD127(lo)) differenciálódásának csökkenését mutatta, bár a citokin és a granzyme B termelési szintek nem változtak. Nevezetesen a CD11a hiány a CD62L(+) központi memóriacellák jelentősen megnövekedett generációját eredményezte. Meglepő módon a CD8 T-sejtek, amelyekből hiányzik a CD11a, robusztus másodlagos választ adtak a fertőzésre. Ezek az eredmények együttesen azt mutatták, hogy a CD11a expresszió hozzájárul az elsődleges CD8 T-sejtek expanziójához és differenciálódásához, de nélkülözhető lehet a fertőzésre adott másodlagos válaszokhoz.

Croft, N. P., et al. (2013). “Az antigén expressziójának kinetikája és az epitóp megjelenése vírusfertőzés során.”PLoS Pathog 9(1): e1003129. PubMed

jelenlegi ismeretek az antigén dinamikájáról a T-sejtek bemutatása a vírusfertőzés során nagyon gyenge annak ellenére, hogy alapvető fontosságú a vírusellenes immunitás megértése szempontjából. Itt egy fejlett tömegspektrometriás módszerrel egyidejűleg számszerűsítjük nyolc vaccinia vírus peptid-MHC komplex (epitóp) megjelenését a fertőzött sejteken, valamint a forrás antigének mennyiségét a fertőzés után többször. Az eredmények megdöbbentő 1000-szeres bőségtartományt, valamint feltűnően eltérő kinetikát mutatnak a megfigyelt epitópok között. A fehérje expresszió kezdete és az epitóp megjelenítés közötti szoros összefüggés a legtöbb antigén esetében a legerősebb támogatást nyújtja ahhoz, hogy az antigén megjelenése nagyrészt az antigének transzlációjához, nem pedig későbbi lebomlásához kapcsolódik. Végül megmutatjuk az epitóp abundancia és az immunodominancia hierarchia közötti teljes kapcsolatot e nyolc epitóp között. Ez a tanulmány rávilágít a vírusantigén gazdaszervezet általi bemutatásának összetettségére, és bemutatja az egyszerű modellek gyengeségét, amelyek feltételezik, hogy a teljes fehérjeszint közvetlenül kapcsolódik az epitóp megjelenéséhez és az immunogenitáshoz.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Az allodeterminánsok lokalizációja a H-2KB antigéneken, amelyeket monoklonális antitestekkel és H-2 mutáns egerekkel határoztak meg.”Proc Natl Acad Sci U S A 79 (15): 4737-4741. PubMed

az antigén determinánsok topográfiai elrendezését a H-2kb molekulán antitestverseny-vizsgálatokkal vizsgálták monoklonális Anti-Kb antitestek sorozatával. Az allodeterminánsok képződésében részt vevő aminosavmaradékok azonosítására h-2KB mutáns egerek meghatározott aminosav-szubsztitúciókkal elemeztük. Megállapítottuk, hogy a determinánsok a H-2kb molekula legalább két térben különálló klaszterében helyezkednek el. Az egyik klaszter determinánsait a 155-ös és a 156-os aminosav-pozíció mutációi befolyásolják, míg a második klaszter determinánsait a 77-es és a 89-es pozíció aminosav-szubsztitúciói módosítják. A determinánsok harmadik klasztere esetében nem lehetett releváns aminosavpozíciókat azonosítani, de a versenyadatok azt mutatják, hogy ez a klaszter szomszédos a másodikkal. Az adatok arra utalnak, hogy a H-2 antigének első két doménje hordozza a legtöbb allodeterminánst.

Kategória: Articles

0 hozzászólás

Vélemény, hozzászólás?

Avatar placeholder

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.