InVivoMAb anti-mus MHC klass I (H-2kb) (klon: Y-3)

Reed, B. K., et al. (2015). “En mångsidig enkel Infångningsanalys för att bedöma den strukturella integriteten hos MHC Multimerreagens.”PLoS En 10 (9): e0137984. PubMed

antigenspecifika T-cellsvar kan visualiseras med användning av MHC:peptidmultimerer. I fall där robusta t-cellkontroller inte är lätt tillgängliga för att bedöma integriteten hos multimerreagens före analys av begränsat prov, förmågan att bedöma den strukturella integriteten hos MHC-multimerer innan de används i kritiska experiment skulle vara användbar. Vi presenterar en metod för att undersöka den strukturella integriteten hos MHC-multimerer med hjälp av antikroppar specifika för konformationella determinanter. Pärlor belagda med anti-mus Ig inkuberas med konformationsspecifik monoklonal musantikropp och sedan med fluorescerande märkt MHC multimer. Pärlans förmåga att fånga den märkta multimeren kan mätas semi-kvantitativt med flödescytometri. På detta sätt kan korrekt vikning av MHC-multimerer visualiseras och partier av multimer kan jämföras för kvalitetskontroll. Eftersom det finns flera konformationella epitoper bildade av olika molekylära interaktioner mellan tung kedja, peptid och beta2M, kan denna fångstanalys bedöma troheten för varje aspekt av multimerstruktur, beroende på tillgängligheten av antikroppar. Det beskrivna tillvägagångssättet kan vara särskilt användbart för studier med oersättliga prover, inklusive patientprover som samlats in i kliniska prövningar.

Zanker, D., et al. (2015). “T-celler som känner igen en 11mer influensapeptid komplex till H-2D (b) visar promiskuitet för peptidlängd.”Immunolcell Biol 93 (5): 500-507. PubMed

t-cellrepertoar väljs enligt självpeptid-MHC (major histokompatibilitetskomplex) komplex i tymus. Även om de flesta perifera T-celler känner igen specifika patogen-härledda peptider som är komplexa till själv-MHC uteslutande, har vissa korsreaktivitet mot andra själv-eller främmande peptider som presenteras av själv-MHC-molekyler; ett fenomen som ofta kallas T-cellreceptor (TCR) promiskuitet eller degenerering. TCR promiskuitet har tillskrivits olika autoimmuna tillstånd. Å andra sidan anses det vara en mekanism för en relativt begränsad TCR-repertoar för att hantera en potentiellt mycket större antigenpeptidrepertoar. Sådan egenskap har också använts för att kringgå självtolerans för utveckling av cancervaccin. Även om många studier undersökte sådan degenerering för peptid av samma längd, rapporterade få studier sådana egenskaper för peptider av olika längd. I denna studie karakteriserade vi fint CD8 ( + ) T-cellsvaret specifikt för en 11mer peptid härledd från influensa A viralt polymerasbasiskt protein 2. Den kortsiktiga t-cellinjen, trots att den hade mycket partisk TCR, kunde reagera med flera peptider med olika längd som delar samma kärnsekvens. Out-data visade tydligt vikten av detaljerade och kvantitativa bedömningar för sådan t-cellspecificitet. Våra data betonar också vikten av biokemisk demonstration av den naturligt presenterade minimala peptiden.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “Strukturella och funktionella korrelat av förbättrad antiviral immunitet genererad av heteroklitiska CD8 T-cellepitoper.”J Immunol 192 (11): 5245-5256. PubMed

peptider som binder dåligt till MHC-klass i-molekyler framkallar ofta T-cellsvar med låg funktionell aviditet. Peptidmodifiering genom att ändra ankarresten underlättar ökad bindningsaffinitet och kan framkalla T-celler med ökad funktionell aviditet mot den infödda epitopen (“heteroclitic”). Denna förstärkta MHC-bindning kommer sannolikt att öka halveringstiden och ytdensiteten hos det heteroklitiska komplexet, men exakt hur detta förbättrade T-cellsvar uppträder in vivo är inte känt. Dessutom kommer den ideala heteroklitiska epitopen att framkalla T-cellsvar som fullständigt korsreagerar med den inhemska epitopen, maximerar skyddet och minimerar oönskade off-target-effekter. Sådana epitoper har varit svåra att identifiera. I denna studie, med hjälp av möss infekterade med ett murint koronavirus som kodar epitoper som framkallar höga (S510, CSLWNGPHL)- och låga (s598, RCQIFANI)-funktionella aviditetsvar, visar vi att ökat uttryck av peptid S598 men inte S510 genererade T-celler med förbättrad funktionell aviditet. Således kan immunsvar förstärkas mot t-cellepitoper med låg funktionell aviditet genom att öka Ag-densiteten. Vi identifierade också en heteroclitisk epitop (RCVIFANI) som framkallade ett t-cellrespons med nästan fullständig korsreaktivitet med nativ epitop och visade ökad MHC/peptid överflöd jämfört med nativ S598. Strukturella och termiska smältanalyser indikerade att q600v-substitutionen förbättrade stabiliteten hos peptiden/MHC-komplexet utan att kraftigt förändra den antigena ytan, vilket resulterade i mycket korsreaktiva T-cellsvar. Våra data belyser att ökad peptid / MHC-komplex display bidrar till heteroklitisk epitopeffektivitet och beskriver parametrar för att maximera immunsvar som korsreagerar med den inhemska epitopen.

Bose, T. O., et al. (2013). “Cd11a reglerar effektor CD8 T-celldifferentiering och central minnesutveckling som svar på infektion med Listeria monocytogenes.”Infektera Immun 81 (4): 1140-1151. PubMed

beta2 (CD18) integriner med alfa-kedjor CD11a, -b, -c och-d är viktiga vidhäftningsmolekyler som är nödvändiga för leukocytmigrering och cellulära interaktioner. CD18-brist leder till återkommande bakterieinfektioner och dålig sårläkning på grund av minskad migration av leukocyter till inflammatoriska platser. CD8 T-celler uppreglerar också CD11a, CD11b och CD11c vid aktivering. Den roll dessa molekyler spelar för CD8 T-celler in vivo är emellertid inte känd. För att bestämma funktionen hos enskilda beta2-integriner undersökte vi CD8 T-cellsvar på Listeria monocytogenes-infektion i cd11a-, CD11b-och CD11c-bristfälliga möss. Frånvaron av CD11b eller CD11c hade ingen effekt på genereringen av antigenspecifika CD8-T-celler. Däremot reducerades storleken på det primära CD8 T-cellsvaret i CD11a-bristfälliga möss signifikant. Dessutom visade svaret i CD11a (- / – ) möss minskad differentiering av kortlivade effektorceller(KLRG1(hi) CD127 (lo)), även om produktionsnivåerna för cytokin och granzyme B inte påverkades. I synnerhet resulterade CD11a-brist i kraftigt förbättrad generering av CD62L (+) centrala minnesceller. Överraskande monterade CD8 T-celler som saknade CD11a ett robust sekundärt svar på infektion. Sammantaget visade dessa resultat att CD11a-uttryck bidrar till expansion och differentiering av primära CD8-T-celler men kan vara dispenserbara för sekundära svar på infektion.

Croft, N. P., et al. (2013). “Kinetik av antigenuttryck och epitoppresentation under virusinfektion.”PLoS Pathog 9 (1): e1003129. PubMed

aktuell kunskap om dynamiken i antigenpresentation till T-celler under virusinfektion är mycket dålig trots att den är av grundläggande betydelse för vår förståelse av antiviral immunitet. Här använder vi en avancerad masspektrometrimetod för att samtidigt kvantifiera presentationen av åtta vacciniaviruspeptid-MHC-komplex (epitoper) på infekterade celler och mängderna av deras källantigener vid flera gånger efter infektion. Resultaten visar ett häpnadsväckande 1000-faldigt intervall i överflöd samt påfallande olika kinetik över de övervakade epitoperna. Den täta korrelationen mellan början av proteinuttryck och epitop display för de flesta antigener ger det starkaste stödet hittills att antigenpresentation till stor del är kopplad till översättning och inte senare nedbrytning av antigener. Slutligen visar vi en fullständig koppling mellan epitopen överflöd och immunodominanshierarkin för dessa åtta epitoper. Denna studie belyser komplexiteten hos viral antigenpresentation av värden och visar svagheten hos enkla modeller som antar att totala proteinnivåer är direkt kopplade till epitoppresentation och immunogenicitet.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Lokalisering av allodeterminanter på H-2kb-antigener bestämda med monoklonala antikroppar och h-2-mutanta möss.”Proc Natl Acad Sci U S A 79 (15): 4737-4741. PubMed

det topografiska arrangemanget av antigena determinanter på h-2kb-molekylen undersöktes genom antikroppskonkurrensstudier med en serie monoklonala anti-Kb-antikroppar. För identifiering av aminosyrarester som deltar i bildandet av allodeterminanter h-2kb mutanta möss med definierade aminosyrasubstitutioner analyserades. Determinanterna befanns vara belägna i minst två rumsligt separata kluster på H-2kb-molekylen. Determinanter för ett kluster påverkas av mutationer vid aminosyrapositionerna 155 och 156, medan determinanter för ett andra kluster modifieras av aminosyrasubstitutioner vid positionerna 77 och 89. För ett tredje kluster av determinanter kunde inga relevanta aminosyrapositioner identifieras, men tävlingsdata indikerar att detta kluster ligger intill den andra. Data tyder på att de två första domänerna av H-2-antigener bär de flesta allodeterminanter.

Kategorier: Articles

0 kommentarer

Lämna ett svar

Platshållare för profilbild

Din e-postadress kommer inte publiceras.