InVivoMAb anti-mus MHC klasse I (H-2kb) (Klon: Y-3)

Rørblad, B. K., et al. (2015). “En Allsidig Enkel Fangstanalyse for Å Vurdere DEN Strukturelle Integriteten TIL MHC Multimer-Reagenser.”PLoS En 10 (9): e0137984 . PubMed

Antigen-spesifikke t-celleresponser kan visualiseres ved HJELP AV MHC: peptid multimere. I tilfeller der robuste t-cellekontroller ikke er lett tilgjengelige for å vurdere integriteten til multimerreagenser før analyse av begrenset prøve, vil evnen til å vurdere DEN strukturelle integriteten TIL MHC multimere før bruk i kritiske eksperimenter være nyttig. VI presenterer en metode for å undersøke DEN strukturelle integriteten TIL MHC multimere ved hjelp av antistoffer som er spesifikke for konformasjonelle determinanter. Perler belagt med anti-mus Ig inkuberes med konformasjon-spesifikke mus monoklonalt antistoff og deretter med fluorescently merket MHC multimer. Evnen til perlen til å fange den merkede multimer kan måles semi-kvantitativt ved flowcytometri. PÅ denne måten kan RIKTIG folding AV MHC multimere visualiseres og grupper av multimer kan sammenlignes for kvalitetskontroll. Fordi det er flere konformasjons epitoper dannet av ulike molekylære interaksjoner mellom tungkjede, peptid og beta2M, kan denne fangstanalysen vurdere trofastheten til hvert aspekt av multimer-strukturen, avhengig av tilgjengeligheten av antistoffer. Den beskrevne tilnærmingen kan være spesielt nyttig for studier med uerstattelige prøver, inkludert pasientprøver samlet i kliniske studier.

Zanker, D., et al. (2015). “T-celler som gjenkjenner et 11mer influensapeptid kompleksert TIL H-2D (b), viser promiskuitet for peptidlengde.”Immunol Celle Biol 93 (5): 500-507. PubMed

T-celle repertoar er valgt i henhold til selvpeptid-MHC (major histocompatibility complex) komplekser i thymus. Selv om de fleste perifere t-celler gjenkjenner spesifikke patogen-avledede peptider som er kompleksert til SELV-MHC utelukkende, har noen kryssreaktivitet til andre selv-eller fremmede peptider presentert av SELV-MHC-molekyler; et fenomen som ofte kalles t-cellereseptor (TCR) promiskuitet eller degenerasjon. TCR promiskuitet har blitt tilskrevet ulike autoimmune forhold. På den annen side betraktes det som en mekanisme for et relativt begrenset tcr-repertoar for å håndtere et potensielt mye større antigenpeptidrepertoar. Slike egenskaper har også blitt brukt til å omgå selvtoleranse for kreftvaksineutvikling. Selv om mange studier utforsket slik degenerasjon for peptid av samme lengde, rapporterte få studier slike egenskaper for peptider av forskjellig lengde. I denne studien karakteriserte vi fint CD8 ( + ) T-celleresponsen spesifikk for et 11mer peptid avledet fra influensa a viral polymerase basisk protein 2. Den kortsiktige t-cellelinjen, til tross for å ha svært forspent TCR, var i stand til å reagere med flere peptider av forskjellig lengde som deler samme kjernesekvens. Out data viste tydelig betydningen av detaljerte og kvantitative vurderinger for slike t-celle spesifisitet. Våre data understreker også betydningen av biokjemisk demonstrasjon av det naturlig presenterte minimale peptidet.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “Strukturelle og funksjonelle korrelater av forbedret antiviral immunitet generert av heteroklitiske CD8 T – cellepitoper.”J Immunol 192(11): 5245-5256. PubMed

Peptider som binder dårlig TIL MHC-klasse i-molekyler, fremkaller ofte Lavfunksjonelle Aviditets-t-celleresponser. Peptidmodifisering ved å endre ankerresten letter økt bindingsaffinitet og kan fremkalle T-celler med økt funksjonell aviditet mot den innfødte epitopen (“heteroklitisk”). DENNE FORSTERKEDE MHC-bindingen vil sannsynligvis øke halveringstiden og overflatetettheten til det heteroklitiske komplekset, men nøyaktig hvordan denne forbedrede t-celleresponsen oppstår in vivo er ikke kjent. Videre vil den ideelle heteroklitiske epitopen fremkalle t-celleresponser som helt kryssreagerer med den innfødte epitopen, maksimerer beskyttelse og minimerer uønskede off-target-effekter. Slike epitoper har vært vanskelig å identifisere. I denne studien, ved bruk av mus infisert med et murint koronavirus som koder for epitoper som fremkaller høye (S510, CSLWNGPHL)- og lave (s598, RCQIFANI)-funksjonelle aviditetsresponser, viser vi at økt ekspresjon Av peptid s598, men Ikke S510 genererte T-celler med forbedret funksjonell Aviditet. Dermed kan immunresponser forsterkes mot t-cellepitoper med lav funksjonell aviditet ved å øke Ag-tettheten. Vi identifiserte også en heteroklitisk epitop (RCVIFANI) som fremkalte En t-cellerespons med nesten fullstendig kryssreaktivitet med innfødt epitop og viste økt MHC/peptid overflod sammenlignet med innfødt S598. Strukturelle og termiske smelteanalyser indikerte AT q600v-substitusjonen forbedret stabiliteten til peptid / MHC-komplekset uten å endre den antigene overflaten sterkt, noe som resulterte i svært kryssreaktive t-celleresponser. Våre data fremhever at økt peptid / MHC-kompleks skjerm bidrar til heteroklitisk epitopeffekt og beskriver parametere for å maksimere immunresponser som kryssreagerer med den innfødte epitopen.

Bose, T. O., et al. (2013). “CD11a regulerer effektor CD8 t-celledifferensiering og sentral minneutvikling som respons på infeksjon Med Listeria monocytogenes.”Infiser Immun 81 (4): 1140-1151 . PubMed

beta2 (CD18) integriner Med alfa-kjeder CD11a, -b, -c og-d er viktige adhesjonsmolekyler som er nødvendige for leukocyttmigrasjon og cellulære interaksjoner. CD18-mangel fører til gjentatte bakterielle infeksjoner og dårlig sårheling på grunn av redusert migrasjon av leukocytter til inflammatoriske steder. CD8 t-celler oppregulerer Også CD11a, CD11b og CD11c ved aktivering. Imidlertid er rollen disse molekylene spiller FOR CD8 T-celler in vivo ikke kjent. For å bestemme funksjonen til individuelle beta2-integriner, undersøkte VI CD8 T – cellerespons på Listeria monocytogenes infeksjon i CD11a -, CD11b-og CD11c-mangelfulle mus. Fraværet Av CD11b eller CD11c hadde ingen effekt på genereringen av antigen-SPESIFIKKE CD8 T-celler. I motsetning til dette ble størrelsen på DEN primære CD8 t-celleresponsen i CD11a-mangelfulle mus signifikant redusert. Videre viste responsen I CD11a(-/-) mus redusert differensiering av kortvarige effektorceller (KLRG1 (hi) CD127 (lo)), selv om cytokin og granzyme B produksjonsnivåer var upåvirket. CD11a-mangel resulterte i kraftig forbedret generasjon AV CD62L ( + ) sentrale minneceller. Overraskende, CD8 T-celler mangler CD11a montert en robust sekundær respons på infeksjon. Samlet sett viste disse funnene At CD11a-uttrykk bidrar til utvidelse og differensiering av primære CD8 T-celler, men kan være dispensable for sekundære responser på infeksjon.

Croft, N. P., et al. (2013). “Kinetikk av antigenuttrykk og epitoppresentasjon under virusinfeksjon.”PLoS Patogen 9 (1): e1003129. PubMed

dagens kunnskap om dynamikken i antigenpresentasjon til T-celler under virusinfeksjon er svært dårlig til tross for at det er av fundamental betydning for vår forståelse av antiviral immunitet. Her bruker vi en avansert massespektrometri metode for samtidig å kvantifisere presentasjonen av åtte vaccinia virus peptid-MHC komplekser (epitoper) på infiserte celler og mengder av deres kildeantigener flere ganger etter infeksjon. Resultatene viser en oppsiktsvekkende 1000 ganger rekkevidde i overflod, så vel som påfallende forskjellig kinetikk på tvers av epitopene som overvåkes. Den tette korrelasjonen mellom utbruddet av proteinuttrykk og epitopdisplay for de fleste antigener gir den sterkeste støtten til dags dato at antigenpresentasjon i stor grad er knyttet til oversettelse og ikke senere nedbrytning av antigener. Til slutt viser vi en fullstendig frakobling mellom epitop overflod og immunodominans hierarki av disse åtte epitoper. Denne studien fremhever kompleksiteten av viral antigenpresentasjon av verten og demonstrerer svakheten i enkle modeller som antar at totale proteinnivåer er direkte knyttet til epitoppresentasjon og immunogenitet.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Lokalisering av allodeterminanter På H-2kb antigener bestemt med monoklonale antistoffer Og H-2 mutantmus.”Proc Natl Acad Sci U S A 79 (15): 4737-4741. PubMed

det topografiske arrangementet av antigendeterminanter på h-2kb-molekylet ble undersøkt ved antistoffkonkurransestudier med en serie monoklonale anti-Kb-antistoffer. For identifisering av aminosyrerester som deltar i dannelsen av allodeterminanter h-2Kb mutantmus med definerte aminosyresubstitusjoner ble analysert. Determinanter ble funnet å være lokalisert i minst to romlig separate klynger På h-2kb molekylet. Determinanter av en klynge påvirkes av mutasjoner ved aminosyreposisjoner 155 og 156, mens determinanter av en annen klynge modifiseres ved aminosyresubstitusjoner i posisjoner 77 og 89. For en tredje klynge av determinanter kunne ingen relevante aminosyreposisjoner identifiseres, men konkurransedata indikerer at denne klyngen ligger ved siden av den andre. Dataene antyder at De to første domenene Av h-2 antigener bærer de fleste allodeterminanter.

Kategorier: Articles

0 kommentarer

Legg igjen en kommentar

Avatar placeholder

Din e-postadresse vil ikke bli publisert.