InVivoMAb anti-muis MHC klasse I (H-2Kb) (kloon: Y-3)

Reed, B. K., et al. (2015). “Een veelzijdige eenvoudige Capture Assay voor het beoordelen van de structurele integriteit van MHC Multimer reagentia.”PLoS One 10 (9): e0137984. PubMed

Antigeenspecifieke t-celresponsen kunnen worden gevisualiseerd met behulp van MHC:peptide multimers. In gevallen waarin robuuste t-celcontroles niet gemakkelijk beschikbaar zijn om de integriteit van multimer-reagentia te beoordelen voordat een beperkt monster wordt geanalyseerd, zou het nuttig zijn om de structurele integriteit van MHC-multimers te beoordelen voordat ze in kritische experimenten worden gebruikt. We presenteren een methode om de structurele integriteit van MHC multimers te onderzoeken met behulp van antilichamen specifiek voor conformationele determinanten. De parels met anti-muis IG met een laag worden bedekt worden geïncubeerd met bouw-specifiek muis monoclonal antilichaam en dan met fluorescently geëtiketteerd MHC multimer. De capaciteit van de parel om geëtiketteerde multimer te vangen kan semi-kwantitatief door cytometry stroom worden gemeten. Op deze manier kan het juiste vouwen van MHC multimers worden gevisualiseerd en kunnen batches van multimer worden vergeleken voor kwaliteitscontrole. Omdat er veelvoudige conformational epitopes door diverse moleculaire interactie onder zware ketting, peptide, en beta2M worden gevormd, kan deze vangstanalyse de trouw van elk aspect van multimeter structuur, afhankelijk van de beschikbaarheid van antilichamen beoordelen. De beschreven aanpak kan met name nuttig zijn voor studies waarbij onvervangbare monsters worden gebruikt, met inbegrip van patiëntenmonsters die in klinische proeven zijn verzameld.

Zanker, D., et al. (2015). “T cellen die een 11mer influenzapeptide herkennen gecomplexeerd aan H-2D (b) tonen promiscuïteit voor peptide lengte.”Immunol Cell Biol 93 (5): 500-507. PubMed

t-celrepertoire wordt geselecteerd op basis van zelfpeptide-MHC (major histocompatibility complex) complexen in de thymus. Hoewel de meeste perifere T-cellen specifieke pathogeen-afgeleide peptiden die uitsluitend aan zelf-MHC worden gecomplexeerd, bezitten sommigen kruisreactiviteit aan andere zelf of buitenlandse peptiden die door zelf-MHC molecules worden voorgesteld; een fenomeen vaak genoemd promiscuïteit of degeneratie van de T-celreceptor (TCR). TCR promiscuïteit is toegeschreven aan verschillende auto-immuunziekten. Anderzijds, wordt het beschouwd als een mechanisme voor een vrij beperkt TCR-repertoire om een potentieel veel groter antigenic peptide-repertoire te behandelen. Dergelijke eigenschap is ook gebruikt om zelftolerantie voor de ontwikkeling van het kankervaccin te omzeilen. Hoewel vele studies dergelijke degeneratie voor peptide van dezelfde lengte onderzochten, rapporteerden weinig studies dergelijke eigenschappen voor peptides van verschillende lengte. In deze studie hebben we de CD8(+) T-cel respons specifiek gekarakteriseerd voor een 11mer peptide afgeleid van influenza A virale polymerase basic protein 2. De T-cellijn op korte termijn, ondanks het bezit van hoogst bevooroordeelde TCR, kon met veelvoudige peptides van verschillende lengte reageren die dezelfde kernopeenvolging delen. Uit de gegevens bleek duidelijk het belang van gedetailleerde en kwantitatieve beoordelingen voor dergelijke T-cel specificiteit. Onze gegevens benadrukken ook het belang van biochemische demonstratie van het natuurlijk gepresenteerde minimale peptide.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “Structurele en functionele correlaten van verbeterde antivirale immuniteit gegenereerd door heteroclitische CD8 T cel epitopen.”J Immunol 192 (11): 5245-5256. PubMed

peptiden die slecht binden aan MHC-klasse I-moleculen wekken vaak lage functionele aviditeit t-celreacties op. De peptide wijziging door het ankerresidu te veranderen vergemakkelijkt verhoogde bindende affiniteit en kan cellen van T met verhoogde functionele avidity naar de inheemse epitope (“heteroclitic”) opwekken. Deze verhoogde MHC-band zal waarschijnlijk de halveringstijd en oppervlaktedichtheid van heteroclitic complex verhogen, maar precies hoe deze verbeterde de celreactie van t in vivo voorkomt is niet gekend. Voorts zal de ideale heteroclitic epitope t celreacties opwekken die volledig kruis-reageren met de inheemse epitope, het maximaliseren van bescherming en het minimaliseren van ongewenste off-target effecten. Zulke epitopen zijn moeilijk te identificeren. In deze studie, gebruikend muizen die met een muriene coronavirus besmet zijn dat epitopen codeert die hoge (S510, CSLWNGPHL)- en lage (s598, RCQIFANI)-functionele aviditeitsreacties opwekken, tonen wij aan dat de verhoogde uitdrukking van peptide s598 maar niet S510 T-cellen met verbeterde functionele aviditeit produceerde. Aldus, kunnen de immune reacties naar de celepitopes van T met lage functionele avidity worden verhoogd door de dichtheid van Ag te verhogen. We identificeerden ook een heteroclitic epitope (RCVIFANI) die een T-celrespons met bijna volledige kruisreactiviteit met inheemse epitope lokte en verhoogde MHC/peptide overvloed in vergelijking met inheemse s598 toonde. De structurele en thermische smeltanalyses gaven aan dat q600v substitutie de stabiliteit van peptide/MHC complex verbeterde zonder de antigene oppervlakte zeer te veranderen, resulterend in hoogst kruisreactieve celreacties van T. Onze gegevens benadrukken dat de verhoogde peptide / MHC complexe vertoning aan heteroclitic epitope doeltreffendheid bijdraagt en parameters voor het maximaliseren van immune reacties beschrijven die kruis-reageren met de inheemse epitope.

Bose, T. O., et al. (2013). “CD11a regelt effector CD8 T celdifferentiatie en centrale geheugenontwikkeling in reactie op infectie met Listeria monocytogenes.”Infect Immun 81 (4): 1140-1151. PubMed

bèta-2 (CD18)-integrines met alfa-ketens CD11a,- b,- c en-d zijn belangrijke adhesiemoleculen die nodig zijn voor leukocytenmigratie en cellulaire interacties. CD18-deficiëntie leidt tot terugkerende bacteriële infecties en slechte wondgenezing als gevolg van verminderde migratie van leukocyten naar ontstekingsplaatsen. CD8 T cellen ook upregulate CD11a, CD11b, en CD11c bij activering. Nochtans, is de rol die deze molecules voor CD8 T-cellen in vivo spelen niet gekend. Om de functie van individuele bèta-2-integrines te bepalen, onderzochten we CD8 T-celreacties op Listeria monocytogenes-infectie bij CD11a -, CD11b-en CD11c-deficiënte muizen. De afwezigheid van CD11b of CD11c had geen effect op de aanmaak van antigeen-specifieke CD8 T-cellen. In tegenstelling, was de grootte van de primaire CD8 T celrespons in CD11a-deficiënte muizen beduidend verminderd. Bovendien vertoonde de respons in CD11a (- / – ) muizen een verminderde differentiatie van kortlevende effectorcellen(KLRG1(hi) CD127 (lo)), hoewel de productieniveaus van cytokine en granzyme B onaangetast waren. Met name, resulteerde de tekortkoming CD11a in zeer verbeterde generatie van CD62L(+) centrale geheugencellen. Verrassend, brachten CD8 T-cellen zonder CD11a een robuuste secundaire reactie op besmetting op. Samen genomen, toonden deze bevindingen aan dat CD11a-uitdrukking tot uitbreiding en differentiatie van primaire CD8 T-cellen bijdraagt maar voor secundaire reacties op besmetting overbodig kan zijn.

Croft, N. P., et al. (2013). “Kinetiek van antigeen expressie en epitope presentatie tijdens virusinfectie.”PLoS Pathog 9 (1): e1003129. PubMed

de huidige kennis over de dynamiek van de presentatie van antigeen aan T-cellen tijdens virale infectie is zeer slecht, ondanks het feit dat het van fundamenteel belang is voor ons begrip van antivirale immuniteit. Hier gebruiken we een geavanceerde massaspectrometrie methode om gelijktijdig de presentatie van acht vaccinia virus peptide-MHC complexen (epitopen) op geïnfecteerde cellen en de hoeveelheden van hun bronantigenen op meerdere tijdstippen na infectie te kwantificeren. De resultaten tonen een opzienbarende 1000-vouwenwaaier in overvloed evenals opvallend verschillende kinetiek over de gecontroleerde epitopes. De strakke correlatie tussen begin van eiwituitdrukking en epitope vertoning voor de meeste antigenen verstrekt tot op heden de sterkste steun dat de antigeenpresentatie grotendeels met vertaling en niet later degradatie van antigenen wordt verbonden. Ten slotte tonen we een volledige loskoppeling tussen de overvloed aan epitopen en de immunodominantiehiërarchie van deze acht epitopen. Deze studie benadrukt de complexiteit van virale antigeenpresentatie door de gastheer en toont de zwakheid van eenvoudige modellen aan die veronderstellen totale eiwitniveaus direct met epitopepresentatie en immunogeniciteit worden verbonden.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Lokalisatie van allodeterminanten op h-2Kb antigenen bepaald met monoklonale antilichamen en H-2 mutant muizen.”Proc Natl Acad Sci U S A 79 (15): 4737-4741. PubMed

de topografische rangschikking van antigene determinanten op het H-2Kb-molecuul werd onderzocht door middel van antilichaamcompetitiestudies met een reeks monoklonale anti-Kb-antilichamen. Voor de identificatie van aminozuurresiduen die deelnemen aan de vorming van allodeterminanten werden h-2Kb gemuteerde muizen met gedefinieerde aminozuursubstituties geanalyseerd. De determinanten werden gevonden in ten minste twee ruimtelijk gescheiden clusters op het H-2Kb molecuul. Determinanten van één cluster worden beïnvloed door mutaties op aminozuurposities 155 en 156, terwijl determinanten van een tweede cluster worden gewijzigd door aminozuursubstituties op posities 77 en 89. Voor een derde cluster van determinanten konden geen relevante aminozuurposities worden geïdentificeerd, maar uit concurrentiegegevens blijkt dat deze cluster grenst aan de tweede. De gegevens suggereren dat de eerste twee domeinen van H-2 antigenen de meeste allodeterminanten dragen.

Categorieën: Articles

0 reacties

Geef een antwoord

Avatar plaatshouder

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd.