InVivoMAb anti-mouse MHC Classe I (H-2Kb) (Clone: Y-3)

Reed, B. K., et al. (2015). “A Versatle Simple Capture Assay for Assessing the Structural Integrity of MHC Multimer Reagents.”PLoS One 10(9): e0137984. PubMed

as respostas das células T específicas ao antigénio podem ser visualizadas utilizando MULTIMETROS MHC: peptídeo. Nos casos em que controles robustos de células T não estão prontamente disponíveis para avaliar a integridade de reagentes multímeros antes de analisar amostras limitadas, a capacidade de avaliar a integridade estrutural dos multímeros MHC antes de seu uso em experimentos críticos seria útil. Apresentamos um método para sondar a integridade estrutural dos multímeros MHC utilizando anticorpos específicos para determinantes conformacionais. Grânulos revestidos com Ig anti-mouse são incubados com anticorpo monoclonal de camundongo específico de conformação e, em seguida, com marcador fluorescente MHC multimer. A capacidade da bead para capturar o multimer rotulado pode ser medida semi-quantitativamente por citometria de fluxo. Desta forma, o dobramento correto de MULTIMERS MHC pode ser visualizado e lotes de multimer pode ser comparado para o controle de qualidade. Porque existem várias conformações epitopos formado por várias interações moleculares entre cadeia pesada, peptídeo, e beta2M, essa captura de ensaio pode avaliar a fidelidade de cada aspecto do multimer estrutura, dependendo da disponibilidade de anticorpos. A abordagem descrita pode ser particularmente útil para estudos que utilizem amostras insubstituíveis, incluindo amostras de doentes colhidas em ensaios clínicos.

Zanker, D., et al. (2015). Células T reconhecendo um peptídeo influenza de 11mer complexado a H-2D (B) mostram promiscuidade para o comprimento do peptídeo.”Immunol Cell Biol 93 (5): 500-507. PubMed

T-cell reportoire is selected according to self peptide-MHC (major histocompatibility complex) complexes in the thymus. Embora a maioria das células T periféricas reconheça peptídeos derivados de patógenos específicos completados a auto-MHC exclusivamente, alguns possuem reactividade cruzada a outros peptídeos auto-estranhos ou autopartidários apresentados por moléculas auto-MHC; um fenômeno muitas vezes chamado de promiscuidade do receptor das células-T (TCR) ou degenerescência. A promiscuidade do TCR tem sido atribuída a várias condições auto-imunes. Por outro lado, é considerado um mecanismo para um repertório TCR relativamente limitado para lidar com um repertório de peptídeo antigênico potencialmente muito maior. Tal propriedade também tem sido utilizada para contornar a auto-tolerância para o desenvolvimento de vacinas contra o cancro. Embora muitos estudos tenham explorado essa degenerescência para peptídeo de mesmo comprimento, poucos estudos relataram tais propriedades para peptídeos de comprimento diferente. Neste estudo, caracterizámos finamente a resposta das células T CD8(+) específica para um peptídeo de 11mer derivado da proteína básica da polimerase vírica 2. A linha T-cell de curto prazo, apesar de possuir TCR altamente tendenciosa, foi capaz de reagir com múltiplos peptídeos de comprimento diferente compartilhando a mesma sequência principal. Os dados apresentados mostraram claramente a importância de avaliações pormenorizadas e quantitativas para essa especificidade das células T. Nossos dados também enfatizam a importância da demonstração bioquímica do peptídeo mínimo naturalmente apresentado.

Trujillo, J. A., et al. (2014). “Structural and functional correlates of enhanced antiviral immunity generated by heteroclitic CD8 T cell epitopes.”J Immunol 192 (11): 5245-5256. PubMed

péptidos que se ligam mal às moléculas MHC classe I provocam frequentemente respostas de avidez T de baixa funcionalidade. A modificação do Peptide alterando o resíduo da âncora facilita a afinidade obrigatória aumentada e pode provocar pilhas de T com avidez funcional aumentada para o epítopo nativo (“heteroclítico”). Essa ligação aumentada de MHC provavelmente aumentará a meia-vida e a densidade superficial do complexo heteroclítico, mas precisamente como essa resposta aprimorada de células T ocorre in vivo não é conhecida. Além disso, o epítopo heteroclítico ideal provocará respostas de células T que reagem completamente com o epítopo nativo, maximizando a proteção e minimizando efeitos indesejáveis fora do alvo. Esses epítopos têm sido difíceis de identificar. Neste estudo, utilizando ratos infectados com um coronavírus Murino que codifica epitópios que provocam respostas de avidez funcional elevadas (S510, CSLWNGPHL) e baixas (S598, RCQIFANI), mostramos que o aumento da expressão de células T peptídicas s598 mas não S510 geraram com avidez funcional aumentada. Assim, as respostas imunitárias podem ser aumentadas para epítopos de células T com baixa avidez funcional, aumentando a densidade Ag. Também identificamos um epítopo heteroclítico (RCVIFANI) que provocou uma resposta das células T com quase completa reactividade cruzada com o epítopo nativo e demonstrou um aumento da abundância MHC/peptídeo em comparação com o s598 nativo. Análises estruturais e térmicas de fusão indicaram que a substituição Q600V melhorou a estabilidade do complexo peptídico/MHC sem alterar grandemente a superfície antigénica, resultando em respostas de células T altamente reativas cruzadas. Nossos dados destacam que o aumento da exibição do complexo peptídeo/MHC contribui para a eficácia do epítopo heteroclítico e descreve parâmetros para maximizar as respostas imunes que reagem de forma cruzada com o epítopo nativo.

Bose, T. O., et al. (2013). “CD11a regula a diferenciação de células T efetoras CD8 e o desenvolvimento da memória central em resposta à infecção por Listeria monocytogenes.”Infecte Immun 81( 4): 1140-1151. As integrinas PubMed

beta2 (CD18) com cadeias alfa CD11a, -b, -c E-d são moléculas de adesão importantes necessárias para a migração de leucócitos e interações celulares. A deficiência em CD18 leva a infecções bacterianas recorrentes e a uma cicatrização deficiente da ferida devido à migração reduzida de leucócitos para locais inflamatórios. As células T CD8 também atualizam CD11a, CD11b e CD11c após a ativação. No entanto, o papel que estas moléculas desempenham para as células T CD8 in vivo não é conhecido. Para determinar a função das integrinas beta2 individuais, examinámos as respostas das células T CD8 à infecção por Listeria monocytogenes em ratinhos com deficiência em CD11a, CD11b e CD11c. A ausência de CD11b ou CD11c não teve qualquer efeito na geração de células T CD8 específicas aos antigénios. Em contraste, a magnitude da resposta primária de células T CD8 em camundongos deficientes em CD11a foi significativamente reduzida. Além disso, a resposta em camundongos CD11a(-/-) exibiu diferenciação reduzida de células efetoras de curta duração (KLRG1(hi) CD127(lo)), embora os níveis de produção de citocina e granzima B não tenham sido afetados. Notavelmente, a deficiência de CD11a resultou em uma geração bastante aprimorada de células de memória central CD62L (+). Surpreendentemente, as células T CD8 sem CD11a montaram uma resposta secundária robusta à infecção. Em conjunto, estes resultados demonstraram que a expressão CD11a contribui para a expansão e diferenciação das células T CD8 primárias, mas pode ser dispensável para respostas secundárias à infecção.

Croft, N. P., et al. (2013). “Kinetics of antigen expression and epitope presentation during virus infection.”PLoS Pathog 9 (1): e1003129. PubMed

o conhecimento actual sobre a dinâmica da apresentação de antigénios às células T durante a infecção viral é muito fraco, apesar de ser de importância fundamental para a nossa compreensão da imunidade anti-viral. Aqui nós usamos um método avançado de espectrometria de massa para quantificar simultaneamente a apresentação de oito complexos peptídicos-MHC do vírus vaccinia (epitópios) em células infectadas e as quantidades de seus antígenos de origem em múltiplas vezes após a infecção. Os resultados mostram uma gama surpreendente de 1000 vezes em abundância, bem como cinética muito diferente nos epítopos monitorados. A estreita correlação entre o início da expressão proteica e a exibição de epítopos para a maioria dos antigénios fornece o suporte mais forte até à data de que a apresentação de antigénios está em grande parte ligada à tradução e não posterior degradação dos antigénios. Finalmente, mostramos uma completa desconexão entre a abundância de epítopos e a hierarquia de imunodominância desses oito epítopos. Este estudo destaca a complexidade da apresentação do antigénio viral pelo hospedeiro e demonstra a fraqueza de modelos simples que assumem que os níveis totais de proteínas estão diretamente ligados à apresentação do epitópio e imunogenicidade.

Hammerling, G. J., et al. (1982). “Localization of allodeterminants on H-2Kb antigens determined with monoclonal antibodies and H-2 mutant mice.”Proc Natl Acad Sci U S A 79 (15): 4737-4741. PubMed

the topographic arrangement of antigenic determinants on the H-2Kb molecule was investigated by anticorpo competition studies with a series of monoclonal anti-Kb antibodies. Para a identificação dos resíduos de aminoácidos que participam na formação de aloderminantes ratos mutantes h-2Kb com substituições de aminoácidos definidas foram analisadas. Verificou-se que os determinantes estão localizados em pelo menos dois clusters espacialmente separados na molécula H-2kb. Os determinantes de um cluster são afetados por mutações nas posições de aminoácidos 155 e 156, enquanto os determinantes de um segundo cluster são modificados por substituições de aminoácidos nas posições 77 e 89. Para um terceiro cluster de determinantes, nenhuma posição de aminoácidos relevante poderia ser identificada, mas os dados de competição indicam que esse cluster é adjacente ao segundo. Os dados sugerem que os dois primeiros domínios dos antígenos H-2 carregam a maioria dos allodeterminants.

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