InVivoMAb anti-șoarece MHC clasa I (H-2kb) (clonă: Y-3)

Reed, B. K., și colab. (2015). “Un test simplu de captare Versatil pentru evaluarea integrității structurale a reactivilor MHC Multimer.”PLoS Unul 10(9): e0137984. PubMed

răspunsurile celulelor T specifice antigenului pot fi vizualizate folosind MHC:multimeri peptidici. În cazurile în care controalele robuste ale celulelor T nu sunt ușor disponibile pentru a evalua integritatea reactivilor multimer înainte de a analiza eșantionul limitat, capacitatea de a evalua integritatea structurală a MULTIMERILOR MHC înainte de utilizarea lor în experimente critice ar fi utilă. Prezentăm o metodă de sondare a integrității structurale a MULTIMERILOR MHC utilizând anticorpi specifici determinanților conformaționali. Margelele acoperite cu Ig anti-șoarece sunt incubate cu anticorpi monoclonali de șoarece specifici conformației și apoi cu MULTIMER MHC etichetat fluorescent. Capacitatea talonului de a capta multimerul marcat poate fi măsurată semi-cantitativ prin citometrie în flux. În acest mod, plierea corectă a MULTIMERELOR MHC poate fi vizualizată și loturile de multimer pot fi comparate pentru controlul calității. Deoarece există mai mulți epitopi conformaționali formați prin diferite interacțiuni moleculare între lanțul greu, peptida și beta2M, acest test de captare poate evalua fidelitatea fiecărui aspect al structurii multimer, în funcție de disponibilitatea anticorpilor. Abordarea descrisă ar putea fi deosebit de utilă pentru studiile care utilizează probe de neînlocuit, inclusiv probe de pacienți colectate în studiile clinice.

Zanker, D. și colab. (2015). “Celulele T care recunosc o peptidă gripală 11mer complexată la H-2D(b) prezintă promiscuitate pentru lungimea peptidei.”Imunol Cell Biol 93 (5): 500-507. PubMed

repertoriul celulelor T este selectat în funcție de complexele self peptide-MHC (complex major de histocompatibilitate) din timus. Deși majoritatea celulelor T periferice recunosc peptide specifice derivate din agenți patogeni complexate exclusiv la auto-MHC, unele posedă reactivitate încrucișată la alte peptide auto sau străine prezentate de moleculele de auto-MHC; un fenomen denumit adesea promiscuitate sau degenerare a receptorului celulelor T (TCR). Promiscuitatea TCR a fost atribuită diferitelor afecțiuni autoimune. Pe de altă parte, este considerat un mecanism pentru un repertoriu TCR relativ limitat pentru a face față unui repertoriu peptidic antigenic potențial mult mai mare. O astfel de proprietate a fost, de asemenea, utilizată pentru a ocoli auto-toleranța pentru dezvoltarea vaccinului împotriva cancerului. Deși multe studii au explorat o astfel de degenerare pentru peptide de aceeași lungime, puține studii au raportat astfel de proprietăți pentru peptide de lungime diferită. În acest studiu, am caracterizat fin răspunsul celulelor T CD8 (+) specific pentru o peptidă 11mer derivată din proteina bazică a polimerazei virale gripale A 2. Linia de celule T pe termen scurt, în ciuda faptului că posedă TCR extrem de părtinitoare, a fost capabilă să reacționeze cu mai multe peptide de lungime diferită care împărtășesc aceeași secvență de bază. Datele au arătat în mod clar importanța evaluărilor detaliate și cantitative pentru o astfel de specificitate a celulelor T. Datele noastre subliniază, de asemenea, importanța demonstrației biochimice a peptidei minime prezentate în mod natural.

Trujillo, J. A. și colab. (2014). “Corelații structurale și funcționale ale imunității antivirale sporite generate de epitopii celulelor T heteroclitice CD8.”J Immunol 192 (11): 5245-5256. PubMed

peptidele care se leagă slab de moleculele MHC clasa I provoacă adesea răspunsuri ale celulelor T cu aviditate scăzută. Modificarea peptidelor prin modificarea reziduului de ancoră facilitează afinitatea crescută de legare și poate provoca celule T cu aviditate funcțională crescută către epitopul nativ (“heteroclitic”). Această legare MHC mărită este probabil să crească timpul de înjumătățire și densitatea suprafeței complexului heteroclitic, dar exact modul în care acest răspuns îmbunătățit al celulelor T apare in vivo nu este cunoscut. Mai mult, epitopul heteroclitic ideal va provoca răspunsuri ale celulelor T care reacționează complet încrucișat cu epitopul nativ, maximizând protecția și minimizând efectele nedorite în afara țintei. Astfel de epitopi au fost dificil de identificat. În acest studiu, folosind șoareci infectați cu un coronavirus murin care codifică epitopi care provoacă răspunsuri de aviditate funcționale ridicate (S510, CSLWNGPHL) și scăzute (s598, RCQIFANI), arătăm că expresia crescută a peptidei s598, dar nu S510, a generat celule T cu aviditate funcțională îmbunătățită. Astfel, răspunsurile imune pot fi mărite către epitopii celulelor T cu aviditate funcțională scăzută prin creșterea densității Ag. De asemenea, am identificat un epitop heteroclitic (RCVIFANI) care a provocat un răspuns al celulelor T cu reactivitate încrucișată aproape completă cu epitopul nativ și a demonstrat o abundență crescută de MHC/peptide comparativ cu s598 nativ. Analizele de topire structurală și termică au indicat faptul că substituția Q600V a sporit stabilitatea complexului peptid/MHC fără a modifica foarte mult suprafața antigenică, rezultând răspunsuri foarte reactive ale celulelor T. Datele noastre evidențiază faptul că afișajul complex peptidic/MHC crescut contribuie la eficacitatea epitopului heteroclitic și descrie parametrii pentru maximizarea răspunsurilor imune care reacționează încrucișat cu epitopul nativ.

Bose, T. O. și colab. (2013). “CD11a reglează diferențierea celulelor T efectoare CD8 și dezvoltarea memoriei centrale ca răspuns la infecția cu Listeria monocytogenes.”Infectează Immun 81 (4): 1140-1151. PubMed

integrinele beta2 (CD18) cu lanțuri alfa CD11a,-b,- c și-d sunt molecule importante de adeziune necesare pentru migrarea leucocitelor și interacțiunile celulare. Deficitul de CD18 duce la infecții bacteriene recurente și la vindecarea slabă a rănilor datorită migrației reduse a leucocitelor către locurile inflamatorii. Celulele T CD8 reglează, de asemenea, CD11a, CD11b și CD11c la activare. Cu toate acestea, rolul pe care aceste molecule îl joacă pentru celulele T CD8 in vivo nu este cunoscut. Pentru a determina funcția integrinelor beta2 individuale, Am examinat răspunsurile celulelor T CD8 la infecția cu Listeria monocytogenes la șoarecii cu deficit de CD11a, CD11b și CD11c. Absența CD11b sau CD11c nu a avut niciun efect asupra generării de celule T CD8 specifice antigenului. În schimb, magnitudinea răspunsului primar al celulelor T CD8 la șoarecii cu deficit de CD11a a fost semnificativ redusă. Mai mult, răspunsul la șoarecii CD11a (- / – ) a prezentat o diferențiere redusă a celulelor efectoare de scurtă durată [KLRG1(hi) CD127(lo)], deși nivelurile de producție de citokine și granzyme B nu au fost afectate. În special, deficitul de CD11a a dus la generarea mult îmbunătățită a celulelor centrale de memorie CD62L (+). În mod surprinzător, celulele T CD8 lipsite de CD11a au montat un răspuns secundar robust la infecție. Luate împreună, aceste constatări au demonstrat că expresia CD11a contribuie la extinderea și diferențierea celulelor T CD8 primare, dar poate fi dispensabilă pentru răspunsurile secundare la infecție.

Croft, N. P., și colab. (2013). “Cinetica expresiei antigenului și prezentarea epitopului în timpul infecției cu virus.”PLoS Pathog 9 (1): e1003129. PubMed

cunoștințele actuale despre dinamica prezentării antigenului la celulele T în timpul infecției virale sunt foarte slabe, în ciuda faptului că sunt de o importanță fundamentală pentru înțelegerea imunității antivirale. Aici folosim o metodă avansată de spectrometrie de masă pentru a cuantifica simultan prezentarea a opt complexe peptidice-MHC ale virusului vaccinia (epitopi) pe celulele infectate și cantitățile antigenelor lor sursă de mai multe ori după infecție. Rezultatele arată o gamă uimitoare de 1000 de ori din abundență, precum și o cinetică izbitor de diferită în epitopii monitorizați. Corelația strânsă dintre debutul expresiei proteinelor și afișarea epitopilor pentru majoritatea antigenelor oferă cel mai puternic suport până în prezent că prezentarea antigenului este în mare parte legată de traducere și nu de degradarea ulterioară a antigenelor. În cele din urmă, arătăm o deconectare completă între abundența epitopilor și ierarhia imunodominanței acestor opt epitopi. Acest studiu evidențiază complexitatea prezentării antigenului viral de către gazdă și demonstrează slăbiciunea modelelor simple care presupun că nivelurile totale de proteine sunt direct legate de prezentarea epitopului și imunogenitatea.

Hammerling, G. J. și colab. (1982). “Localizarea alodeterminanților pe antigene H-2kb determinate cu anticorpi monoclonali și șoareci mutanți H-2.”Proc Natl Acad Sci U S A 79(15): 4737-4741. PubMed

aranjamentul topografic al determinanților antigenici pe molecula H-2kb a fost investigat prin studii de concurență a anticorpilor cu o serie de anticorpi monoclonali anti-Kb. Pentru identificarea resturilor de aminoacizi care participă la formarea alodeterminanților șoarecii mutanți H-2kb cu substituții de aminoacizi definite au fost analizați. Determinanții s-au dovedit a fi localizați în cel puțin două clustere separate spațial pe molecula H-2kb. Determinanții unui grup sunt afectați de mutații la pozițiile aminoacizilor 155 și 156, în timp ce determinanții unui al doilea grup sunt modificați prin substituții de aminoacizi la pozițiile 77 și 89. Pentru un al treilea grup de factori determinanți nu au putut fi identificate poziții relevante ale aminoacizilor, dar datele privind concurența indică faptul că acest grup este adiacent celui de-al doilea grup. Datele sugerează că primele două domenii ale antigenelor H-2 poartă majoritatea alodeterminanților.

Categorii: Articles

0 comentarii

Lasă un răspuns

Avatar placeholder

Adresa ta de email nu va fi publicată.